背景：肝癌是恶性程度极高的肿瘤，目前仍缺乏有效的治疗手段。肿瘤特异性增殖腺病毒又称溶瘤病毒特异的在肿瘤细胞中复制、增殖，进而杀死肿瘤细胞，是一种理想的抗癌药物。肿瘤靶向的基因病毒治疗以溶瘤腺病毒为载体，携带各种治疗基因，协同基因治疗和病毒治疗的优势增强抗癌能力，在肝癌治疗领域展现出极大的潜力。然而，针对促凋亡基因、自杀基因等有细胞毒性的常用治疗基因，调控其适时地在特定空间表达对治疗效果至关重要。目标：为确保细胞毒性治疗基因最低程度表达于正常细胞，同时避免它们过早表达引起细胞死亡而影响病毒的复制与包装，治疗基因的表达需要严格限制在肿瘤细胞内，并发生于病毒复制晚期。为此，本课题构建了治疗基因表达依赖于腺病毒基因组复制的溶瘤腺病毒载体AdCN305，以提高基因病毒治疗的安全性和有效性。方法：腺病毒晚期基因启动子活性与病毒基因组复制密切相关，它的三联先导序列能协助腺病毒晚期转录的mRNA从细胞核转运到胞浆进行翻译，抑制宿主细胞基因表达，大大提高病毒晚期蛋白的表达量。我们以双调控靶向肿瘤的腺病毒载体为基础进行改造，去除Fiber基因后面的终止信号，连入内部核糖体进入位点使治疗基因与腺病毒主要晚期转录原件共表达，利用腺病毒自身主要晚期启动子调控外源基因的表达，进而达到提高治疗基因表达量，并推迟其表达时间的目的。载体构建成功后，我们利用该系统表达了报告基因HcRed，以监控外源基因在该新型载体背景下的表达行为：表达治疗基因白介素24，以实现肝癌的基因病毒治疗。结果：实验结果显示，外源基因的表达依赖病于毒基因组复制，限制性表达于肝癌细胞；表达方式模拟内源基因Fiber,大量表达于病毒复制晚期；在肿瘤细胞内，治疗基因与腺病毒晚期蛋白共表达系统不会削弱病毒的复制、包装；溶瘤腺病毒AdCN305-IL-24感染正常细胞和肿瘤细胞后，高水平白介素24表达和病毒大量复制协同作用对肝癌细胞显示出强烈的细胞毒性，而对正常细胞没有影响；AdCN305-IL-24能有效抑制BEL7404移植瘤的生长。结论：病毒复制依赖晚期表达载体AdCN305使治疗基因的表达依赖于病毒基因组的复制，相对于外源性启动子提高了靶向肿瘤表达的特异性，另一方面腺病毒主要晚期启动子启动外源基因高效转录的作用大大提高了治疗基因的表达量，保证了病毒基因治疗的安全性和有效性，必将得到广泛应用。AdCN305-IL-24疗效确切、安全性高，具有良好的临床应用前景，为肝癌以及其他肿瘤提供了新的治疗方法。