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第一部分 阿苯达唑对胰腺癌的抗肿瘤效应及机制目的:检测阿苯达唑(ABZ)对人胰腺癌SW1990和PANC-1细胞株增殖、迁移和凋亡的影响;同时构建胰腺癌异位移植瘤模型,进一步检测ABZ对胰腺癌的体内抗肿瘤作用。方法:人胰腺癌SW1990和PANC-1细胞株经梯度浓度的ABZ或吉西他滨(GEM,200 nM)处理12-48小时。细胞增殖用MTT实验和细胞集落形成实验检测。细胞迁移用细胞划痕实验和Transwell实验检测。细胞凋亡用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测。同时构建人胰腺癌SW1990异位移植瘤模型检测ABZ对胰腺癌的体内抗肿瘤作用,并通过Ki-67抗原免疫组化染色法评价ABZ对胰腺癌组织增殖的影响。结果:与空白对照组相比,ABZ处理组胰腺癌SW1990和PANC-1细胞株的增殖减弱,且作用呈浓度依赖性,但是同等浓度作用下ABZ抑制胰腺癌细胞增殖的效果却略逊于吉西他滨(GEM),差异有统计学意义[(SW1990:Control vs.200 nMABZ:96.12±3.27%vs.83.76±1.79%,P<0.01;200 nM ABZ vs.200 nM GEM:83.76±1.79%vs.74.79±2.81%,P<0.01);(PANC-1:Control vs.200 nM ABZ:78.67±1.55%vs.70.33±0.85%,P<0.01;200 nM ABZ vs.200 nM GEM:70.33±0.85%vs.66.17±1.25%,P<0.001)]。MTT实验与上述细胞集落实验结果一致。同时与空白对照组相比,ABZ处理组人胰腺癌SW1990和PANC-1细胞株的细胞迁移数目明显减少,且作用呈浓度依赖性,但是同等浓度条件下,GEM对于人胰腺癌SW1990和PANC-1细胞株的迁移抑制作用却略优于ABZ,差异有统计学意义[(SW1990:Control vs.200 nMABZ:317.33±23.33 vs.202.33±6.55,P<0.01;200nM ABZ vs.200 nM GEM:202.33±6.55 vs.204.33±15.76,P<0.01);(PANC-1:Control vs.200 nM ABZ:382.33±4.99 vs.265.33±29.78,P<0.01;200nM ABZ vs.200 nM GEM:265.33±29.78 vs.129.33±33.81,P<0.01)]。划痕实验结果和上述Transwell实验结果一致,进一步验证了 ABZ对于人胰腺癌SW1990和PANC-1细胞株迁移的抑制作用。此外ABZ可以显著增加两种胰腺癌细胞株的凋亡,且作用呈浓度依赖性,空白组和处理组之间差异有统计学意义(SW1990:Control vs.400 nM ABZ:14.45±0.78 vs.22.42±0.90,P<0.001;PANC-1:Control vs.400nMABZ:18.36±2.25 vs.28.16±4.18,P<0.05)。最后体内实验结果显示ABZ处理人胰腺癌SW1990细胞异位移植肿瘤模型21天后,ABZ处理组小鼠的肿瘤体积较对照组小鼠肿瘤体积明显缩小(P<0.01)。两组小鼠肿瘤组织增殖抗原免疫组化实验结果也显示,与对照组小鼠肿瘤组织相比,ABZ处理组小鼠的增殖抗原表达水平明显降低。结论:ABZ以浓度依赖性方式抑制胰腺癌细胞的增殖和迁移,这一作用机制可能与ABZ增加胰腺癌细胞凋亡有关,且同等浓度条件下ABZ的抗胰腺癌效应略逊于GEM。第二部分 阿苯达唑对胰腺癌的放疗增敏作用及机制目的:评价阿苯达唑(ABZ)对缺氧条件下人胰腺癌PATU8988和SW1990细胞株放疗耐受现象的改善作用及潜在机制;通过构建胰腺癌异位移植瘤模型,进一步验证ABZ对胰腺癌的放疗增敏作用及机制。方法:在常氧或缺氧(COC12,50μM)条件下及ABZ(200nM)处理的情况下,采用不同剂量的X射线处理两种胰腺癌细胞株24-48小时。两种胰腺癌细胞的增殖用MTT实验和细胞集落实验检测。胰腺癌细胞的凋亡用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测。Western-blotting则用于检测缺氧诱导因子1-α(HIF-1α)蛋白和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达水平。同时构建人胰腺癌PATU8988细胞异位移植瘤模型检测ABZ对胰腺癌放疗的体内增敏作用。实验中胰腺癌异位移植瘤模型被分为四组,分别为空白组、ABZ组、辐照组、辐照和ABZ组,并通过Ki-67抗原免疫组化染色和TUNEL凋亡染色分别评价四组胰腺癌组织的增殖和凋亡。结果:与同一 X射线辐照剂量下两种常氧组胰腺癌细胞株相比,缺氧组胰腺癌细胞的克隆增殖更强;而同一 X射线辐照剂量下常氧与ABZ共同处理组和缺氧与ABZ共同处理组胰腺癌细胞之间的克隆增殖差异却不明显。MTT实验对四组胰腺癌细胞增殖的评价结果和上述细胞集落实验结果一致。同时与4Gy X射线辐照剂量条件下两种缺氧组胰腺癌细胞株相比,常氧组胰腺癌细胞株的凋亡现象更明显;而X射线辐照条件下,缺氧与ABZ共同处理组和常氧与ABZ共同处理组胰腺癌细胞之间的凋亡差异却不明显。Western-blotting实验结果显示缺氧组胰腺癌细胞中HIF-1α蛋白和bFGF的表达水平显著提高,而ABZ能够减少缺氧条件下胰腺癌细胞内HIF-1α蛋白和bFGF的含量。PATU8988胰腺癌异位移植瘤小鼠体内实验结果则显示,和其它三组肿瘤小鼠相比辐照和ABZ共同处理组小鼠的肿瘤体积最小,增殖抗原表达水平最低,组织凋亡现象最明显,且HIF-1α和bFGF两种蛋白的表达水平也最低。结论:ABZ可以增加胰腺癌细胞和组织对放射治疗的敏感性,其机制可能与ABZ降低胰腺癌细胞和组织内HIF-1α和bFGF表达水平有关。