论文部分内容阅读
目的：1研究不同剂量益气通络解毒方(Yqtljdf)联合吉非替尼(Gefitinib)含药血清对人肺腺癌H1975细胞增殖和凋亡的影响。2研究不同剂量Yqtljdf联合Gefitinib对人肺腺癌H1975细胞BALB/c裸小鼠移植瘤生长的影响。方法：1Yqtljdf低、中、高剂量(15.75，31.5，63g.kg-1)、Yqtljdf低、中、高剂量联合Gefitinib(22.5mg.kg-1)、Gefitinib (22.5mg.kg-1)及生理盐水(NS)对SD大鼠灌胃，持续用药5d，腹主动脉穿刺取血，制备含药血清。2取对数生长期肺癌H1975细胞，分别加入含不同浓度的NS、Gefitinib、Yqtljdf低、中、高剂量及其联合Gefitinib血清的RPMI-1640培养液，分别孵育24h、48h、72h，CCK-8法测量每孔的吸光度(OD)，计算各组细胞的增殖抑制率。3取对数生长期肺癌H1975细胞，分别加入含NS，Gefitinib，Yqtljdf高剂量，Yqtljdf低，中，高剂量联合Gefitinib的含药血清分别作用24h、48h、72h，AnnexinV-FITC/PI染色，用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。4取对数生长期肺癌H1975细胞，分别加入上述各组含药血清干预24h、48h、72h，依次固定、封闭、加一抗、加二抗等处理，应用Image pro-plus6.0病理图片处理软件进行分析。5取浓度为5×107/mL对数生长期肺癌H1975细胞0.2mL接种BALB/c裸鼠腋窝皮下,待瘤体直径达15mm后处死,无菌条件下取出肿瘤,制备瘤细胞悬液,再次以浓度为5×107/mL瘤细胞悬液,每只0.2mL接种BALB/c裸鼠腋窝皮下。6造模成功后随机分为NS组、Gefitinib组、Yqtljdf高剂量组、Yqtljdf低、中、高剂量联合Gefitinib组，分别给予上述药物干预3w,探讨Yqtljdf联合Gefitinib对BALB/c裸鼠移植瘤生长的影响。7上述药物干预3w后，取部分瘤组织，组织匀浆器匀浆，200目网筛过滤，AnnexinV-FITC/PI染色，用流式细胞仪检测瘤组织中细胞凋亡情况。8免疫组化法检测各组移植瘤瘤细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3的表达量的变化。9Western blotting法检测各组移植瘤瘤细胞中VEGF表达量的变化。结果：1Yqtljdf联合Gefitinib组含药血清对肺癌H1975细胞增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性，以Yqtljdf高剂量联合Gefitinib作用72h抑制肺癌H1975细胞增殖作用最好，为42.86%。2Yqtljdf联合Gefitinib组含药血清可促进肺癌H1975细胞均凋亡，且呈剂量和时间依赖性，以10%Yqtljdf高剂量联合Gefitinib作用72h诱导凋亡作用最强，为25.77%。3凋亡相关蛋白Caspase-3表达量与药物剂量、作用时间呈正相关。4Yqtljdf联合Gefitinib可抑制肺癌H1975细胞BALB/c裸小鼠移植瘤的增长，与NS组及Gefitinib组相比，差异显著，具有统计学意义(P<0.05)。5Yqtljdf联合Gefitinib可促进肺癌H1975细胞BALB/c裸小鼠移植瘤瘤细胞的凋亡，与Gefitinib组和NS组，差异显著，具有统计学意义(P<0.05)。6各组移植瘤瘤细胞Caspase-3蛋白表达均呈阳性，且随药物剂量增加Caspase-3蛋白表达量增加，Yqtljdf高剂量联合Gefitinib组表达最强，与NS组和Gefitinib组比较，差异显著，具有统计学意义(P<0.05)。7Yqtljdf联合Gefitinib组VEGF的表达量随药物剂量的增加而降低，与NS组和Gefitinib组比较，差异显著，具有统计学意义(P<0.05)。结论：1体外实验显示Yqtljdf在其联合Gefitinib抑制肺癌H1975细胞增殖、促进凋亡过程中有增效作用，其机制可能是通过上调凋亡相关蛋白Caspase-3的表达实现的。2体内实验显示Yqtljdf在其联合Gefitinib抑制BALB/c裸鼠移植瘤生长的过程中有增效作用，其机制可能是通过上调凋亡相关蛋白Caspase-3的表达，下调VEGF表达，抑制肿瘤血管生成而起作用的。