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目的:1、分离获得骨髓间充质干细胞(BMSCs),用流式细胞仪鉴定BMSCs表面标志物;2、制备人源性羊膜、羊膜下层、脐带动脉脱细胞组织支架;3、通过比较三种脱细胞组织支架的相关性能的优劣,选择一种用作组织工程皮肤的支架材料。方法:1、全骨髓贴壁法分离获得SD大鼠BMSCs;流式细胞术鉴定BMSCs表面标志物;成骨、成脂培养基诱导分化鉴定BMSCs分化潜能。2、使用TritonX-100联合胰酶制备羊膜脱细胞组织支架,使用SDS-核酸酶制备脐带动脉和羊膜下层脱细胞组织支架。3、用苏木素-伊红(HE)染色观察三种脱细胞支架的脱细胞情况;使用扫描电镜观察脱细胞前后组织支架的表面情况;使用万能张力测试仪检测脱细胞组织的机械强度和顺应性;使用细胞增殖-毒性检测法(CCK-8)测定脱细胞支架对细胞的毒性大小。4、应用分离获得的BMSCs细胞作为种子细胞,与所得三种脱细胞组织支架在体外进行共培养,制备出三种复合有细胞的生物支架,并用光镜观察细胞与组织的复合程度。结果:1、BMSCs细胞形态均一、排列整齐、具有较高的纯度,阳性标志物CD29、CD90的表达率分别为(99.8±0.15)%、(96.8±0.89)%,阴性标志物CD45的表达率为(2.2±1.23)%。2、BMSCs成骨诱导分化茜素红染色阳性,成脂诱导分化油红O染色阳性。3、经脱细胞处理后的羊膜、羊膜下层、脐带动脉,HE染色显示:表面无定形物,胶原纤维结构完整,无细胞残留。4、经脱细胞处理后的羊膜、羊膜下层、脐带动脉经扫描电镜观察显示:组织表面粗糙,成网状结构,孔隙大小不一样,无细胞残留。5、经万能测试仪测试,经脱细胞处理后,羊膜、羊膜下层、脐带动脉的最大拉力分别为:(4.56±0.21)N、(13.46±0.18)N、(7.81±0.25)N,羊膜、羊膜下层、脐带动脉的最大拉伸长度分别为:(5.6±0.24)mm、(4.07±0.25)mm、(2.43±0.18)mm。6、三种脱细胞支架与细胞复合后经光镜观察细胞与组织贴合紧密,并且BMSCs在组织上的增殖速度与BMSCs在培养瓶生长时的增殖速度相近。7、经CCK-8实验测定三种脱细胞组织支架的细胞毒性都属于一级,相对毒性较低。结论:1、全骨髓贴壁法分离培养能得到纯度高、状态好的BMSCs。2、脐带动脉与羊膜下层经SDS-核酸酶脱细胞处理、羊膜经TritonX-100与胰酶脱细胞处理后得到了三种较为理想的脱细胞组织支架。3、经过对三种皮肤组织工程材料检测比较,羊膜下层在同样条件下细胞脱净,并且细胞毒性低、顺应性相对较好,机械强度也较强,更适合作为皮肤组织工程的支架材料。