脐带间充质干细胞外泌体对皮肤光老化的保护作用

来源 :安徽医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:silent_snake
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背景皮肤作为人体最大的器官,是一道天然的保护屏障,对化学、物理和生物有害物质等外界环境中的损伤均具有一定的防护作用,是人体的第一道防线。皮肤光损伤将加速皮肤的老化,老化的皮肤在屏障保护、免疫调节等生理作用上均有不同程度的下降,皮肤光老化对于皮肤健康状态的维持是具有严重的负面作用的。长波紫外线和中波紫外线是皮肤光老化的主要来源,流行病学调查显示,皮肤光老化占面部皮肤衰老的80%。皮肤的状况是衡量人体健康的重要因素,人们对于保持年轻健康的皮肤具有更高的要求,皮肤光老化导致皮肤出现皱纹、干燥、弹性下降甚至刺激诱发皮肤恶性肿瘤,这加剧了皮肤正常生理结构的破坏。当前,对于紫外线的防护包括物理遮挡、化学防晒、植物提取物以及抗氧化剂等等。上述防护措施均对紫外线具备一定的防治效果,但均不能令人完全满意,其原因是多方面的,包括患者依从性差、使用不够便捷等原因均可能导致其防治效果受到影响。干细胞及其来源的外泌体是当前再生医学与抗衰老领域的研究热点,干细胞外泌体作为干细胞发挥作用的主要途径,通过干细胞旁分泌作用产生并被输送到细胞中发挥生理功能,影响受体细胞的存活、增殖、迁移以及基因表达,干细胞外泌体已在包括心血管系统、呼吸系统和肝脏疾病的防治中发挥了重要的作用,通过使用干细胞外泌体用于防治皮肤紫外线损伤,在当前研究中相对较少,且缺乏对其机制的探讨。是否可以通过干细胞外泌体的干预用于防治紫外线诱导的皮肤光老化对于进一步丰富皮肤光老化的防治措施,提高现有状况下皮肤光老化的防治疗效具有重要的意义。目的本研究建立在中波紫外线诱导的光老化人真皮成纤维细胞模型与光老化损伤Balb/c小鼠模型的基础上,探讨huc MSC-exo对皮肤光老化模型的影响,并初步探讨其可能的机制。方法使用无血清外泌体的培养基于体外培养huc MSC细胞,收集huc MSC条件培养基,使用超高速离心的方法提取huc MSC-exo并对其进行鉴定;体外培养HDF细胞,使用UVB灯管进行皮肤光老化细胞模型的构建,照光前24h使用huc MSC-exo对HDF细胞进行预处理,照光后0.5h检测ROS的含量;照光后48h使用酶标仪检测细胞增殖活性、使用流式细胞仪检测细胞周期、使用微丝绿色荧光探针标记细胞骨架;照光后72h使用β-半乳糖苷酶检测细胞衰老性损伤,分别使用实时荧光PCR和Western Blot检测包括MMP-1、COL-1和IL-1等因子的表达水平;构建光老化损伤Balb/c小鼠模型,通过病理染色、皮肤宏观评价与弹性测试验证huc MSC-exo对光老化损伤Balb/c小鼠的保护作用。结果本研究中,模型组的ROS含量显著高于对照组,实验组中ROS的产生量较模型组有明显的下降;模型组细胞的增殖活力显著下降,实验组细胞增殖活力有所上升;实验组细胞S期细胞含量低于模型组,G0/G1期细胞含量高于模型组;实验组细胞骨架长宽比趋向于正常,与对照组相似;模型组中衰老细胞比例显著高于实验组;同模型组相比,实验组MMP-1和COL-1m RNA和蛋白的表达分别下调和上调。上述结果中,模型组与对照组相比,实验组与模型组相比,上述指标差异均具有显著性(P<0.05);动物实验中,huc MSC-exo缓解了Balb/c小鼠的皮肤光老化损伤的表现。结论我们的研究建立在HDF细胞光老化模型的基础上,结果表明,huc MSC-exo能调节HDF细胞的生长,也能促进HDF细胞的光老化后修复、减少DNA损伤,延缓UVB诱导的HDF细胞的衰老,提高其增殖活性。同时能显著降低MMPs的表达,减少细胞外基质的降解;缓解Balb/c小鼠皮肤光老化损失。我们可以很明确的看到干细胞外泌体在生物医学领域有极大的发展潜力,这将有助于干细胞外泌体的临床应用。
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