目的:利用人单核白血病细胞(THP-1)建立人类细胞系激发试验(h-CLAT)方法,将h-CLAT实验结果与传统豚鼠实验方法、LLNA法结果进行分析比较,评估h-CLAT方法定性区分致敏物与非致敏物的准确率,为h-CLAT法的科学性和有效性验证提供数据。方法:1.流式细胞术检测THP-1细胞与不同浓度2,4-二硝基氯苯(DNCB)共培养24小时后,共刺激分子CD86与CD54表达变化,以及细胞活力与CD86/CD54表达的关系,确定h-CLAT方法适宜的染毒剂量范围。2.h-CLAT试验检测已知的五种致敏物,DNCB、重铬酸钾(PD)、氢醌(HQ)、硫酸镍(Ni)、丁香酚(EU)和两种非致敏物十二烷基硫酸钠(SLS)、甘油(GC),分析CD86与CD54的变化,将h-CLAT实验结果与传统豚鼠实验方法、LLNA法结果进行比较分析。结果:1.流式细胞术检测THP-1细胞与不同浓度DNCB共培养24小时后的细胞活力,及表面分子CD86/CD54的表达变化。结果显示,细胞活力在65%至95%范围内DNCB刺激THP-1细胞CD86/CD54表达明显上调。当细胞活力＞95%时,CD86/CD54的表达可能无明显变化。由此,h-CLAT试验中各化学物染毒剂量应在CV65～CV95间,即细胞活力为65%到95%的浓度范围,以便更灵敏的检测CD86及CD54表达的变化。2.h-CLAT试验检测已知的五种敛敏性化学物2,4-二硝基氯苯(DNCB)、重铬酸钾(PD)、氢醌(HQ)、硫酸镍(Ni)、丁香酚(EU)和两种非致敏性化学物十二烷基硫酸钠(SLS)、甘油(GC)。h-CLAT实验结果显示经五种敛敏物处理后THP-1细胞CD86/CD54表达明显上调,而非致敏物处理后THP-1细胞CD86/CD54表达变化不明显。以RFI(CD86)≧150来区分致敏物与非致敏物准确率100%,以RFI(CD54)≧150为界限,准确率为85%,指标CD86相对CD54更为敏感和可靠。结果提示h-CLAT法能有效地区分致敏物与非致敏物。结论:h-CLAT方法中化学物对THP-1细胞染毒剂量应在CV65-CV95之间,h-CLAT法能准确区分致敏物与非致敏物,与经典实验方法一致率在85%以上。