【摘 要】
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目的:间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是一类具有自我更新及定向分化能力的细胞,能够发挥修复受损组织,抑制炎症反应和免疫调节的作用,目前成为治疗自身免疫病包括类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA）在内的研究热点。CD4+T细胞亚群失衡在RA发生发展中起重要作用,MSCs能恢复记忆T细胞频率和功能从而缓解病情。MSCs作为理想的治疗手段仍存
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目的:间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是一类具有自我更新及定向分化能力的细胞,能够发挥修复受损组织,抑制炎症反应和免疫调节的作用,目前成为治疗自身免疫病包括类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA）在内的研究热点。CD4+T细胞亚群失衡在RA发生发展中起重要作用,MSCs能恢复记忆T细胞频率和功能从而缓解病情。MSCs作为理想的治疗手段仍存在局限性,衰老是制约MSCs大规模扩增的重要因素,同时衰老MSCs活性降低,导致治疗时衰老MSCs功能异常并削弱其免疫调节功能,如何延缓MSCs衰老提高其免疫调节活性是本实验的目的所在。因此,本课题基于正常MSCs通过上调糖酵解水平更好地发挥作用,旨在探讨MSCs衰老与糖酵解相互影响机制,拟通过促进糖酵解水平来延缓MSCs衰老,从而提高其免疫调节活性,为临床更好的开展MSCs治疗奠定理论基础。方法:1、收集脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs）P3、P8代细胞,与RA患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）共培养,通过q RT-PCR、Western blotting、衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色及FCM等方法评估UC-MSCs衰老状态,分析其对RA外周CD4+T细胞亚群数量的影响。2、糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖（2-DG）阻断P8代UC-MSCs糖酵解,运用q RT-PCR、FCM等方法分析糖酵解对UC-MSCs免疫调节功能的影响。3、采用生物信息学、FCM、IF和q RT-PCR等方法分析P3、P8代细胞及与RA-PBMC共培养体系中糖酵解相关指标,评估衰老UC-MSCs静息及活化状态糖酵解水平。4、运用FCM、q RT-PCR、IF等方法检测二甲双胍（Metformin,Met）处理衰老UC-MSCs并与RA-PBMC共培养后糖酵解关键酶及RA外周CD4+T细胞亚群数量,探讨Met对衰老UC-MSCs糖酵解及其免疫调节功能的影响。5、2-DG+Met/Met处理P8代细胞后,检测衰老相关指标,探究糖酵解是否可延缓UC-MSCs的衰老。6、Met刺激P8代UC-MSCs,同时加入代谢相关信号分子抑制剂,采用Western blotting、FCM等方法研究通过上调糖酵解延缓UC-MSCs衰老的分子调控机制。结果:1、P8较P3代细胞p53和p16含量升高,线粒体活性氧（Mitochondrial reactive oxygen species,mt ROS）表达上调,细胞周期阻滞,SA-β-gal染色阳性率增高,表明UC-MSCs存在复制衰老。RA-PBMC分别与P3和P8代UC-MSCs共培养后,Tfh细胞数量、Th1/Th2、Th17/Treg明显降低,但共培养组中P8代细胞降低不如P3代,表明衰老UC-MSCs对RA外周CD4+T细胞亚群的调节能力减弱。2、阻断糖酵解后,衰老UC-MSCs分泌可溶性细胞因子的能力及对RA外周CD4+T细胞亚群的调节能力均受到抑制,说明糖酵解参与UC-MSCs发挥免疫调节功能。3、静息状态下,衰老并未影响UC-MSCs糖酵解相关酶表达;而在P3/P8代UC-MSCs与RA-PBMC的共培养体系中,UC-MSCs糖酵解上调且P3代细胞高于P8代。4、Met处理可以增强衰老UC-MSCs糖酵解且对RA外周CD4+T细胞亚群的调节能力明显增强,说明Met可能通过上调糖酵解促进衰老UC-MSCs免疫调节功能。5、与Met处理组相比,加入2-DG后,P53、P16表达增多,细胞周期阻滞,表明Met通过增强糖酵解延缓UC-MSCs衰老。6、Met可以促进腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）活化,后者通过抑制磷酸化信号转导与转录激活因子（signal transducer and activator of transcription,STAT）3表达上调衰老UC-MSCs糖酵解。结论:激活AMPK可抑制STAT3通路,并上调HK2表达,从而延缓UC-MSCs衰老,增强其在调控RA CD4+T细胞亚群比例的作用。
其他文献
目的:1995年,Hack首次提出了肌硬膜桥的概念,即存在于枕下肌与硬脊膜之间的致密纤维连接。近年来研究发现头后小直肌、头后大直肌、头下斜肌和枕下区域的项韧带共同发出肌硬膜桥纤维并且通过寰枕后间隙和寰枢后间隙,这些不同来源的肌硬膜桥纤维相互关联,并且部分纤维融合在一起,肌硬膜桥复合体的概念由此提出。本课题组通过对哺乳纲至少5个目中有代表性的动物进行大体解剖和组织学研究,均发现了该结构的存在,提示肌
目的:人类枕下区寰枕间隙存在连接枕下肌与硬脊膜的致密纤维,1995年Hack首次将这种纤维称为肌硬膜桥。研究人员对此结构展开深入研究,随后肌硬膜桥这一概念被不断完善。肌硬膜桥为致密纤维组织,连接枕下肌和硬脊膜,其来源于头后小直肌、头后大直肌、头下斜肌和颈韧带。既往研究推测肌硬膜桥有防止硬脊膜折叠,保持蛛网膜下腔完整性及通畅性等重要生理功能。也有研究表明,枕下肌发生病变,可导致肌硬膜桥的功能障碍,颈
目的与研究背景:乳腺癌是导致全球女性死亡最常见的癌症类型。2020年全球癌症数据报告,全球估计有1930万新发癌症病例和近1000万癌症死亡,女性乳腺癌发病人数超过肺癌成为全球最常见的肿瘤。2020年中国新发乳腺癌病例约为42万,约占全国所有新确诊癌症患者的9.1%,为第四大发病原因,导致近12万人死亡,占中国所有癌症死亡人数的3.9%。Septin（SEPT）家族是一类进化上保守的GTP结合蛋白
背景:类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）是以滑膜组织增生、血管翳形成,炎症细胞浸润导致软骨及骨破坏为主要病理特征的自身免疫病。成纤维样滑膜细胞（Fibroblast-like synoviocyte,FLS）的功能异常是上述病理特征的中心环节,且最近研究认为以FLS为靶点的疗法是未来RA治疗方向。从代谢组学视角深入研究细胞数量功能失调的内在机制已成为近年研究热点,脂肪酸
目的:中国一直以来是一个多民族聚居的国家,各个民族分布在不同地区。云南省是中国多民族聚居的少数民族大省,其分布特征为“大杂居,小聚居”。在地形复杂的云南,各民族间气候特征、饮食习惯等各有差异,其所形成的体质特征也各具特色。纳西族主要分布在云南丽江市的玉龙纳西族自治县,普米族主要分布在云南怒江州的兰坪县与丽江市的宁蒗县。目前两个民族的研究大多集中在人文历史等方面,对其民族间体质特征的研究比较缺乏。本
宫颈癌和子宫内膜癌是常见的两种妇科肿瘤,患病和死亡人数逐年增高。放射治疗（放疗）是宫颈癌和子宫内膜癌主要的治疗手段,但放疗也会导致阴道放射性损伤。阴道微生物群（Vaginal microbiota,VM）是人体共生细菌群落之一,乳杆菌主导的VM对妇科健康产生着重要的影响。放射线可能会破坏乳杆菌在VM中的主导地位,引发的其他厌氧菌增殖,进一步加重放射性损伤。研究表明,益生菌制剂可以通过调节菌群紊乱和
目的与研究背景:乳腺癌是严重危害女性健康的恶性肿瘤,发病率居于前列,有逐年递增趋势,且逐渐趋向年轻化。乳腺癌的发生是由于多个基因产生无法预知的突变,致使乳腺癌的发病率居高不下,对其治疗也变得非常艰难。Lnc RNA是指长度超过二百个核苷酸的DNA转录产物,大多数Lnc RNA在不同组织发挥正常功能中有着重要的影响,如生长、分化、凋亡和细胞周期进展,许多疾病的发展都与Lnc RNA表达紊乱相关。已有
目的:探讨褐藻源性功能化合物海藻酸钠（Sodium alginate,SA）对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠免疫及肠道屏障功能的调节作用及机制。方法:40只雄性BABL/C品系的小鼠随机分组:正常对照组（N组）、免疫抑制模型组（M组）、低剂量海藻酸钠干预组（ALM组,50 mg/kg/d）、高剂量海藻酸钠干预组（AHM组,250 mg/kg/d）。从实验第一日开始,干预组（AHM和ALM组）小鼠连续2
背景:T1期结直肠癌是浸润深度突破黏膜层而局限于粘膜下层的癌症,经根治性切除后有较高的生存率。然而,一些患者可能会出现淋巴结浸润和远处转移,最终可能会导致死亡。本研究的目的是探讨T1结直肠癌患者淋巴结转移的危险因素及其列线图预测模型的应用价值。方法:采用回顾性病例对照研究的方法,收集2011年1月至2021年12月在大连医科大学附属第一医院接受结直肠根治性切除及区域淋巴结清扫的122例T1期结肠癌
背景与目的食管癌的发病率和死亡率较高,微创手术是可切除性食管癌的主要治疗手段之一。而食管与周围结构的解剖层次是进行食管肿瘤切除的形态学基础。有日本学者首先提出食管系膜的概念,对食管系膜进行探究后,认为食管系膜可能和肠系膜类似,包裹食管的血管、神经和淋巴结,形成食管癌局部浸润和淋巴转移的屏障。因此在进行微创食管切除手术时,若将食管系膜内的结构整体打包切除,就可能减少对食管附近其他结构的损伤。食管系膜