【摘 要】
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本室原已从Xcc野生型菌株8004克隆到含有EPS产生相关基因的9.4kbHindⅢ DNA片段,本研究进一步构建了这一片段的6种限制性内切酶酶切图谱,通过转座子Tn5gusA5插入诱变这一克隆片
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本室原已从Xcc野生型菌株8004克隆到含有EPS产生相关基因的9.4kbHindⅢ DNA片段,本研究进一步构建了这一片段的6种限制性内切酶酶切图谱,通过转座子Tn5gusA5插入诱变这一克隆片段和标记置换(marker exchange)构建突变体,发现其中连续的7kb区域中含有一个与EPS产生有关的基因簇,由于未能获得转座子插入及实质,还不清楚于另一端的余下的2kb区域是否与EPS产生有关。将含有这9.4kb DNA片段的重组质粒导入菌株8004,能提高EPS的产量2.8倍。 本研究对以上9.4kbDNA中的“1.9”kb EcoR1 片段进行了测序分析,测序分析结果表明这一片段实际长度为1880bp。进一步对这1880bp DNA进行分析,其中含有一个完整的开放阅读框架(ORF2)和一个不完整的开往阅滨框架(ORF1),ORF1和ORF2的推断性编码产物分别与已报道的GumA和GumB蛋白在氨基酸水平上具有100%的同源性。GumA是一种作用范围较广的调控蛋白,被称为整合寄主因子(IHFα),在大肠杆菌中是由himA基因编码的。GmB可能与糖核苷聚合或EPs输出有关。 本工作还利用所构建的EPS-突变体探讨了EPS对Xcc致病性的影响,结果表明,EPS的产量与致病性呈正相关,按种浓度的大小直接影响到致能力。通过电镜观察还发现,EPS对Xcc从气孔入侵寄主能力具有重要作用。
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