用于监测快速光激活过程的微型吸收光谱仪的研制

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近年发展的几种超分辨显微成像技术突破了光学衍射造成的分辨率极限,为生物医学领域微观世界的研究提供了新的利器。在这些超分辨成像技术中,单分子定位成像法以其同时具备大视场、高灵敏度和样品长时间稳定性的特点受到了高度重视。然而这类方法十分依赖于其所用探针的光激活特性。例如,其重要发展方向之一的快速光激活定位成像的蛋白需要具有高激活速率的特性。而为量化这些特性参数而发展的光激活过程监测系统会对成像蛋白的评价与筛选提供了条件。为了实现对快速光激活过程的监测,本工作目的即为研制一个满足需求的小型化吸收光谱测量系统。为了实现这一目的,对目前常用光致亮荧光蛋白的特性进行了归纳总结。系统在波长、准确性、时间分辨率等方面的需求指标被加以分析。进而根据分析的结果对系统的核心器件进行了选型,并设计构建了一个基于微型光纤光谱仪的吸收谱测量系统。在对系统进行优化后,利用Dronpa作为代表对系统的性能进行了实际的检验。该系统能够以10 ms的时间分辨率,3.8 nm的波长分辨率在440-600 nm的波长探测区间内对快速光激活过程中蛋白吸收谱的时域变化进行测量,并达到2.89×10-3的精确度。而根据监测结果对相应特性参数的量化分析得到了与采用荧光法和吸收谱法的前人工作均可比较的结论,证明了系统对快速光激活过程监测的能力。而与基于荧光的监测方法相比,其测量结果不易受实验设置的影响,系统也更为简单稳定。相比于同样基于吸收的其他监测法,该系统有着优异的测量时间分辨率,及光纤化的紧凑设计,节省了大量的实验室空间。这一系统必将成为研究发展快速光激活定位成像的一个新的有力工具。
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