吡柔比星协同hepaCAM基因对肾癌细胞增殖和周期影响的研究

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第一部分肾癌患者血尿检测及组织中cyclinB1、hepaCAM的表达和意义目的探讨肾癌患者尿标本中血尿的情况及组织中细胞周期蛋白B1(cyclinB1)与肝细胞粘附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)的表达情况和临床意义。方法采用尿干化学法及尿沉渣显微镜检法检测50例肾癌患者尿标本;用RT-qPCR检测cyclinB1及hepaCAM在32例肾癌组织及癌旁组织中的表达,并分析其与各临床参数之间的关系。结果50例肾癌患者中,出现肉眼血尿15例(30%),干化学隐血阳性29例(58%),沉渣镜检红细胞阳性27例(54%)。在32例手术获取的肾癌组织中,26例(81.3%)出现cyclinB1mRNA下调,28例(87.5%)出现hepaCAM mRNA下调。肾癌组织cyclinB1及hepaCAM的mRNA水平均显著低于癌旁组织(P<0.05)。cyclinB1、hepaCAMmRNA的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤亚型及细胞核分级均无关。结论肾癌患者肉眼血尿发现率低,缺乏明显症状,可能是导致肾癌病情延误的原因之一,采用干化学法或沉渣显微镜法检测尿标本可提高血尿发现率,有助于早期发现肾癌;CyclinB1及hepaCAM在肾癌组织中发生明显下调,这是本研究深入探索肾癌术后后续治疗的基本前提。第二部分吡柔比星协同hepaCAM基因进一步下调肾癌细胞中cyclinB1的表达目的研究吡柔比星(pirarubicin, THP)联合hepaCAM基因对肾癌细胞株786-0的影响方法先用吡柔比星处理肾癌细胞株786-0,再用腺病毒作载体向786-0导入hepaCAM基因,以MTT测抑制率,FCM测细胞周期,RT-qPCR测hepaCAM及cyclinB1的mRNA水平,western blot及免疫荧光测hepaCAM及cyclinB1的蛋白表达。结果MTT显示:与药物对照组(THP/pAdH5)和基因对照组(pAdH5-hepaCAM)相比,实验组(THP/pAdH5-hepaCAM)抑制率显著升高(P<0.01)。FCM证实:实验组出现明显G2/M期阻滞。RT-qPCR检测到实验组cyclinB1mRNA水平显著下调(P<0.05)。western blot及免疫荧光检测到cyclinB1蛋白水平明显降低。结论吡柔比星处理后,向肾癌786-0细胞导入hepaCAM基因,能显著降低cyclinB1表达,引起G2/M期阻滞,从而显著抑制癌细胞增殖。因此推测,利用吡柔比星与抑癌基因hepaCAM的协同作用,有望减少肾癌术后的复发。吡柔比星,hepaCAM,cyclinB1,肾癌
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