【摘 要】
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本试验以“香野”草莓匍匐茎为试材,采用组织培养的方法,对茎尖消毒灭菌、诱导分化培养、继代增殖培养、生根壮苗培养等组培快繁关键环节进行了研究,建立了“香野”草莓茎尖组织培养快繁技术。利用正交试验设计方法和单因素方差分析方法优化建立了“香野”草莓茎尖玻璃化法超低温保存体系。试验结果如下:1、“香野”草莓茎尖组培快繁体系的建立:（1）草莓茎尖组培快繁的消毒方式筛选:通过对草莓匍匐茎茎尖不同消毒处理方式进
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本试验以“香野”草莓匍匐茎为试材,采用组织培养的方法,对茎尖消毒灭菌、诱导分化培养、继代增殖培养、生根壮苗培养等组培快繁关键环节进行了研究,建立了“香野”草莓茎尖组织培养快繁技术。利用正交试验设计方法和单因素方差分析方法优化建立了“香野”草莓茎尖玻璃化法超低温保存体系。试验结果如下:1、“香野”草莓茎尖组培快繁体系的建立:（1）草莓茎尖组培快繁的消毒方式筛选:通过对草莓匍匐茎茎尖不同消毒处理方式进行比较,筛选出适宜茎尖的消毒方式为:选择长势强健、没有病虫害的草莓匍匐茎（截取顶部2-4cm）于烧杯中,添加适量的水和洗衣粉浸泡5min后,放于流动水下冲洗0.5h,然后加2-3滴Tween-80试剂,浸泡5min后再放于流动水下冲洗0.5h。将冲洗干净的匍匐茎转移到生物安全柜内,使用无菌水洗涤3-4次,乙醇（75%）浸泡消毒处理30s,再次使用无菌水洗涤3-4次。使用10%次氯酸钠浸泡消毒5min后使用无菌水洗涤4-5次。该消毒方式能够有效的降低茎尖培养的污染率以及褐化率,消毒成效最好,成活率为64.44%。（2）草莓茎尖组培快繁中最佳培养基筛选:通过对含有不同激素配比的培养基对茎尖组培的影响结果进行比较,筛选出适宜草莓茎尖诱导分化培养的培养基是MS+TDZ1.00mg/L+NAA 0.10mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,p H5.8左右;适宜草莓茎尖进行继代增殖培养的培养基是MS+TDZ 0.75mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,p H5.8左右,随着继代次数的增加应逐步降低TDZ浓度;适宜草莓茎尖进行生根壮苗培养的培养基是MS+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,p H5.8左右。2、“香野”草莓茎尖玻璃化法超低温保存体系的建立:（1）草莓茎尖玻璃化法超低温保存体系中预培养方法的筛选:通过对不同蔗糖浓度和暗培养时间对茎尖经过超低温保存后成活率的影响结果进行比较,筛选出预培养方法为:剥开切取消毒过的草莓茎尖（0.5mm）转接培养于MS+7g/L琼脂的预培养基上,蔗糖浓度设置为0.3mol/L时的茎尖成活率最高;在4℃条件下进行暗培养,暗培养时间设置为3d时的茎尖成活率最高。（2）草莓茎尖玻璃化法超低温保存体系中预处理（加载处理和脱水处理）方法的筛选:通过对不同加载液及其加载时间和玻璃化液及其脱水时间对茎尖经过超低温保存后成活率的影响结果进行比较,筛选出预处理方法为:常温条件下,使用LS加载液（0.4mol/L蔗糖+2mol/L甘油+MS）对茎尖进行加载处理60min,茎尖成活率最高;0℃条件下,使用PVS3玻璃化液（50%（w/v）甘油+50%（w/v）蔗糖+MS）对茎尖进行脱水处理2h,茎尖成活率最高。（3）草莓茎尖玻璃化法超低温保存体系中恢复培养基的筛选:通过对不同的恢复培养基对茎尖经过超低温保存后成活率和成苗率的影响结果进行比较,筛选出的恢复培养基是:MS+GA30.1mg/L+TDZ 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L,p H5.8左右。
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