根际铜绿假单胞菌M18中GacA对次级代谢、初级代谢、分泌系统及运动性的全局性调控

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铜绿假单胞菌M18(Pseudomonas aeruginosa M18)是许煜泉教授于1996年在上海郊区甜瓜根际分离得到的一株植物生防菌,该菌可以产生多种次级代谢产物,如:藤黄绿菌素(pyoluteorin, Plt),吩嗪-1-羧酸(phenazine-1-carboxylic acid, PCA),氢氰酸(hydrogen cyanide, HCN),荧光铁载体(pyoverdine),绿脓杆菌螯铁蛋白(pyochelin)等。M18抗生素合成受到多种调控系统的协调影响,其中,GacS/GacA双元调控系统正调控Plt的合成,负调控PCA的合成。本文重点研究了gacA基因突变对M18转录组及菌株代谢和生防功能的全局性影响,结果显示GacS/GacA系统显著影响M18菌株的次级代谢、初级代谢、分泌系统和运动性等方面及其相关基因的表达,具体包括以下三个方面内容:首先,取KB培养基中对数生长后期的M18野生型和gacA突变株培养物进行转录组分析,并用qRT-PCR和lacZ报告融合两种方法对转录组学结果进行验证。转录组分析显示,gacA基因突变后,共有839个基因的转录子水平发生了显著变化(变化2倍以上且p <0.05),大约占M18基因组的15%,其中472个基因转录水平发生下调,367个基因上调。绝大多数次级代谢基因簇,如pvd、pch、plt、amb、hcn等,均受GacA正调控。此外,GacA还调控胞外酶(碱性蛋白酶、磷脂酶C、几丁质酶等)和细胞色素氧化酶(细胞色素O泛氧化酶、细胞色素P450)等。其次,与P、S和N元素利用有关的初级代谢也受GacA调控,如phn、pst、ssu、tau、nor等基因簇。本文选用基本培养基及分别额外添加P、S和N元素的培养基,检测菌株的生长状况,发现GacA正调控N代谢,负调控P和S代谢。最后,GacA调控对象中另一个重要分类是分泌系统和菌毛合成基因,包括H1、H2、H3-T6SSs,Hxc-T2SS,Has、Apr-T1SSs,CupE和Tad。GacA对M18泳动、群集运动和蹭行运动的能力有显著的抑制作用。综上,Gac全局性调控主要涉及次级代谢、初级代谢、分泌系统和运动性等,这一复杂的调控过程需要许多调控系统或因子的协同作用,Gac系统在M18菌株的生态适应与竞争、营养竞争、离子平衡和生防作用等方面具有重要意义。
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