本研究以对多种植物病原菌有拮抗作用的坚强芽孢杆菌（Bacillius.firmld）ZP-1为实验材料,通过硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶层析、离子交换层析等纯化方法成功分离出对枯斑拟盘多毛孢（Pestalotiopsis funerea）具有拮抗活性的抗菌蛋白P₁和P₂,并测定P₂的N末端部分氨基酸序列,确定了P₂为一种枯草芽孢蛋白酶（Subtilisin protease）,通过酶活性测定确定P₁为一种几丁质酶（Chitinase）。实验采用抑菌活性检测,经过硫酸铵分级沉淀,确定抗菌蛋白的硫酸铵最佳饱和度为50%;硫酸铵沉淀后的抗菌蛋白经过透析浓缩后,通过葡聚糖分子筛SephadexG-100柱层析,纯化后得到峰1和峰2两个波峰,波峰间分离明显,几乎没有重叠。抑菌活性检测结果表明峰1具有抑菌活性,而峰2不具有;经葡聚糖分子筛层析收集的活性峰浓缩后,用Q Sepharose Fast Flow阴离子交换树脂做进一步的分离纯化,洗脱后得到三个吸收峰,抑菌活性检测结果表明,峰2和峰3有抑菌活性,吸收峰1不具有;阴离子交换树脂层析得到的两个活性峰浓缩后,分别经SDS-PAGE,结果显示:峰2和峰3电泳后均为单一条带,表明两个峰含有的都是单一蛋白。峰2含有的抗菌蛋白命名为P₁,峰3含有的抗菌蛋白命名为P₂。对坚强芽孢杆菌抗菌蛋白P₁、P₂性质测定,结果发现:P₁蛋白分子量67KD、对热稳定、对紫外线和氯仿稳定、在pH6.0～9.0之间稳定、对胰蛋白酶敏感、对蛋白酶K部分敏感;P₂为分子量约27 KD的抗菌蛋白,它对紫外线和氯仿基本稳定,对高温和酸的耐受性不强,对胰蛋白酶不敏感,对蛋白酶K部分敏感。P₁和P₂均达到了电泳纯,符合蛋白质N末端测序要求。对P₂蛋白的N端测序结果表明,N末端7个氨基酸序列为H₂N-Ala-Gln-Ser-Val-Pro-Tyr-Gly。以此为靶序列在网上通过NCBI对蛋白质序列数据库进行了类似性检索,发现其与来源于芽孢杆菌并且具有抗菌活性的枯草芽孢蛋白酶的前体具有很高的同源性,而且P₂的分子量与枯草芽孢蛋白酶非常相近,由此推断P₂为枯草芽孢蛋白酶;抗菌蛋白P₁在测序过程中出现多头现象,推断P₁为多聚体蛋白,进一步做酶活性检测,发现P₁具有几丁质酶活性,由此推断P₁是一种几丁质酶。