水稻GATEWAY RNA干涉技术的建立及应用研究

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RNA干涉(RNAi)是基因表达调控的一种重要机制,是由双链RNA诱导产生的转录后水平的同源基因沉默现象。RNA介导的基因沉默具有特异性强、效率高等特点,近年来逐渐发展成为适于大规模研究基因功能的反向遗传学手段。利用位点特异性重组的基因克隆技术Gateway Cloning System进行RNAi转基因研究被认为是一种高效率的RNAi研究技术。本研究选择了在水稻根系发生发育过程中特异表达的13个基因为候选基因,利用PCR技术从水稻基因组DNA中扩增出相应基因的GSTs片段。通过位点特异性重组的基因克隆技术Gateway Cloning System,构建了包含有intron的发夹结构RNA载体,经农杆菌介导的遗传转化获得了水稻转基因植株。取野生型植株及转基因植株的根部样品,RT-PCR检测候选基因的表达量显示,转基因植株中目的基因的表达量较其在野生型中的表达量有明显的降低。研究结果证明,利用Gateway Cloning System大规模构建RNAi载体并转化植株,可以实现高效的基因沉默。
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