论文部分内容阅读
目的:多项研究发现,肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma, ccRCC)中异常高表达的程序死亡性分子1 (programmed death ligand 1,PD-L1)与其较差预后密切相关。目前正在进行的Atezolizumab (抗PD-L1抗体)治疗晚期及转移性肾透明细胞癌的临床试验取得了符合预期的阶段性结果,但内源性PD-L1的表达调控机制及其对肿瘤细胞增殖和侵袭能力改变的作用尚不完全清楚。Notch1信号通路在ccRCC的发生发展过程中发挥重要作用,但其与PD-L1之间是否存在相互调控关系亦不清楚。所以本实验主要探索Notch1及内源性PD-L1之间是否存调控与被调控的关系以及PD-L1对ccRCC肿瘤生物学功能的作用。方法:1、首先验证Notch1及PD-L1在37对肾透明细胞癌样本及其瘤旁样本、HKC、786-0和769-P等三种细胞系中的表达情况;2、利用Notch1和PD-L1特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)或过表达质粒分别在786-0及769-P细胞中构建敲低或过表达模型,并检测两者表达水平的变化以探索两者之间的调控关系;4、通过细胞周期分析、MTS及平板克隆评估干预后的肿瘤细胞的增殖能力。同时,通过Transwell及划痕实验对上述细胞的迁移和侵袭能力进行分析。P<0.05时差异具有统计学意义。结果:1、在37对样品中,Notch1和PD-L1在肿瘤组织中同时异常高表达者共26对(70.3%),同时表达降低者共8对(21.6%),而3对(8.1%)样品分析结果为Notch1和PD-L1表达变化方向不一致。同时,Notch1及PD-L1在肿瘤细胞系中的mRNA水平与蛋白水平表达均高于正常细胞系。2、敲低Notch1后,PD-L1在mRNA及蛋白质水平的表达均同时降低;而敲低PD-L1却没有引起Notch1表达水平的变化。3、过表达Notch1后,PD-L1表达同时增高。4、在研究内源性PD-L1在肿瘤细胞生物学行为中发挥的作用时,我们将786-0和769-P细胞株分别分为四组:实验组:PD-L1敲低组和Notch1+PD-L1共敲低组;对照组:阴性组和空白组。MTS实验提示,实验组肿瘤细胞增殖显著减低,Notch1+PD-L1共敲低组细胞增殖能力最低(P<0.05)。细胞周期分析提示,实验组细胞受抑制主要原因在于细胞被阻滞在G1期。平板克隆实验结果与上述两个实验结果相一致。5、Transwell实验提示:实验组肿瘤细胞的迁移和侵袭能力较对照组显著减低,其中Notch1+PD-L1共敲低组细胞的转移侵袭能力最低(P<0.05);其结果与划痕实验相一致。结论:在肾透明细胞癌中,内源性PD-L1表达水平的变化受到Notch1的调控。异常高表达的内源性PD-L1促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭。联合抑制Notch1和PD-L1的抗肿瘤效果可能优于单独抑制PD-L1。