本文从以下几个部分展开论述：　　第一部分 shRNA BAP1和BAP1野生型的构建及BAP1对HNSCC细胞增殖的影响　　目的：构建BAP1基因沉默（shBAP1）及BAP1野生型（BAP1-WT）的细胞系，检测BAP1对头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）细胞的增殖的影响。　　方法：利用免疫印迹法（Western Blot）检测BAP1在六株HNSCC细胞（HN31,HN30,TR146,UMSCC47,SCC154和SCC152）中蛋白表达情况；将含有shRNA-BAP1质粒的大肠杆菌扩增提取质粒，然后构建慢病毒载体；通过Lipofectamine3000和PolyPlus转染试剂介导BAP1-shRNA慢病毒载体转染HNSCC细胞株，筛选成功沉默BAP1基因（shBAP1）的细胞；再将BAP1野生型基因重新导入HN31,HN30和UMSCC47shBAP1细胞内，构建BAP1-WT细胞系；最后利用MTT和克隆形成检测shBAP1,BAP1-WT对HNSCC细胞增殖的影响。　　结果：Western Blot检测显示六株细胞均有不同程度的BAP1蛋白表达。转染后检测显示六株细胞均成功沉默BAP1基因，其中HN31,HN30和UMSCC47成功导入BAP1野生型基因。MTT法和克隆形成试验检测HN31和UMSCC47细胞系的增殖和克隆形成，结果提示HN31和UMSCC47细胞系的shBAP1细胞较对照组（shControl）和BAP1-WT细胞显著抑制细胞的增殖。而shControl和BAP1-WT细胞之间没有统计学意义。　　结论：成功筛选出干扰BAP1理想的转染质粒，并成功构建了人BAP1蛋白低表达及BAP1野生型的HNSCC细胞株。细胞增殖试验和克隆形成试验显示BAP1促进细胞增殖。　　第二部分 BAP1对人HNSCC细胞和肿瘤放射敏感性的影响　　研究目的：观察BAP1对HNSCC细胞体外和肿瘤体内放射敏感性的影响。　　方法：采用克隆形成法观察shBAP1和BAP1-WT对HNSCC细胞的放射敏感性的影响。将HNSCC细胞HN31,HN30,UMSCC47和TR146细胞（TR146没有BAP1-WT组）的shControl组，shBAP1组和BAP1-WT组，分为未电离辐射组，2Gy组，4Gy组和6Gy组，培养10-15天，算出形成克隆数，做出细胞生存曲线，统计差别。然后采用裸鼠动物肿瘤模型观察BAP1在体内的放疗敏感性，将HN31shControl和HN31shBAP1细胞接种于裸鼠右下腹侧，分为HN31shControl未放疗组，HN31shControl放疗组，HN31shBAP1未放疗组和HN31shBAP1放疗组。观察并记录肿瘤的大小，绘制肿瘤生长曲线，统计差异。　　结果：克隆形成试验结果显示shBAP1组比shControl组和BAP1-WT组细胞在放疗后克隆形成明显减少，HN31，HN30，UMSCC47和TR146细胞（TR146没有BAP1-WT组）都显示出有统计学差别。动物模型肿瘤生长曲线显示HN31shControl和HN31shBAP1未放疗组之间，HN31shControl放疗组和未放疗组之间都没有统计差别，而HN31shBAP1放疗组肿瘤生长比HN31shControl放疗组明显缓慢，并且有统计学意义。　　结论：BAP1基因沉默可以提高HNSCC细胞和肿瘤对电离辐射的敏感性。　　第三部分 BAP1对组蛋白H2A泛素化的影响　　研究目的：检测BAP1的去泛素化作用，及其作用底物，分析BAP1基因沉默及BAP1野生型对组蛋白H2A泛素化（H2Aub）的影响。　　材料和方法：利用免疫印迹技术(Western Blot)检测六株HNSCC细胞株的shControl细胞和shBAP1细胞的H2Aub蛋白表达。然后再检测HN31细胞和UMSCC47细胞中的BAP1-WT细胞的H2Aub的蛋白表达。最后利用免疫荧光技术证实BAP1对H2Aub的影响。取第二部分实验获得肿瘤组织，提取蛋白质，检测H2Aub的变化。　　结果：Western Blot结果显示在所有头颈鳞癌细胞系中，shBAP1细胞的H2Aub比shControl细胞明显增多，而在HN31和UMSCC47细胞系的BAP1-WT细胞中的H2Aub再次减少。免疫荧光结果也显示BAP1高表达的细胞H2Aub减少，而BAP1低表达的细胞H2Aub增加。再次证实BAP1去泛素化H2Aub。动物组织也证实了以上结果。　　结论：BAP1具有去泛素化作用，而且H2Aub是BAP1的去泛素化底物。　　第四部分 BAP1影响头颈部鳞状细胞癌放射敏感性机制的初步探讨　　目的：初步探讨BAP1影响头颈部鳞状细胞癌放射敏感性的机制。　　方法与材料：蛋白免疫印迹法（Western Blot）方法检测HN31shControl,HN31shBAP1和HN31BAP1-WT细胞电离辐射前后DNA损伤反应相关蛋白的变化。采用免疫荧光技术检测电离辐射前后DNA损伤相关蛋白的变化，将HN31和UMSCC47细胞的shControl细胞，shBAP1细胞和BAP1-WT细胞分别分为未电离辐射，电离辐射后1小时，电离辐射后4小时和电离辐射后24小时，免疫荧光法分别检测γ-H2AX和BCRA1的foci点，计数并作出图表，统计之间的差别。　　研究结果：Western Blot结果显示电离辐射后p-Chk1,p-Chk2,p53和γ-H2AX增高，但是shBAP1细胞与shControl细胞和BAP1-WT细胞之间所有检测蛋白的表达没有差异。免疫荧光结果显示γ-H2AX foci位点数在电离辐射后1小时显著升高，4小时后回落，24小时逐步恢复正常，UMSCC47的γ-H2AX foci位点数较HN31在相同时间点下降较慢。BRCA1foci位点数也随电离辐射后升高，后逐步回落正常，但是在shBAP1组的BRCA1foci位点数比shControl和BAP1-WT显著减少，且在不同时间点均可以看到此结果。　　结论：BAP1影响BRCA1在细胞核中聚集，BCRA1是一个重要的修复蛋白，故BAP1可能与损伤修复有关。　　第五部分 BAP1蛋白表达与HNSCC复发的相关性研究　　目的：观察BAP1蛋白表达是否影响头颈部鳞状细胞癌复发生存。　　方法：从TCGA数据库抽提头颈部肿瘤患者的临床资料和BAP1的表达的数据。530例患者，其中248例具有BAP1蛋白表达和无复发生存数据的患者纳入本研究分析。Kaplan-Meier方法分析BAP1蛋白表达与无复发生存之间的关系，Log-rank方法统计不同组别间有无显著意义。　　结果：Kaplan-Meier分析显示BAP1蛋白表达与无复发生存相关（p=0.047）。BAP1高表达者无复发生存差。　　结论：BAP1蛋白的表达影响头颈部鳞状细胞癌的无复发生存。