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背景: 急性缺血性脑梗死是发病和死亡的主要原因,并且已经成为成人残疾的首位原因,约占卒中的80%。目前急性脑梗死后早期及时的溶栓治疗是唯一有效的治疗手段。重组组织型纤溶酶原激活物(recombinant tissue plasminogen activator,r-tPA)于1995年首次被证明在急性脑梗死中有效。研究表明,r-tPA仍是目前急性脑梗死患者血管再通根本的治疗药物,但是由于3h的溶栓时间窗的限制,绝大多数患者仍旧失去了治疗的机会。近年来,影像学指导下的缺血性卒中急性期溶栓试验(Echoplanar Imaging Thrombolytic Evaluation Trial,EPITHET)与理解卒中进展的弥散加权和灌注成像评估(Diffusion and Perfusion Imaging Evaluationfor Understanding Stroke Evolution Study, DEFUSE)研究均提示急性脑梗死病人的溶栓治疗可以延长到6h,但是有关超时间窗溶栓治疗后脑组织自由基活性产生怎样的变化?以及caspase-3的表达如何?目前尚无明确定论。 目的: 本研究采用改良的大鼠自体血栓大脑中动脉栓塞(middle cerebral arteryocclusion,MCAO)模型,研究超时间窗溶栓治疗对大鼠急性缺血性脑梗死后一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性及Caspase-3表达的影响,为临床急性脑梗死后溶栓治疗提供理论依据。 方法: 1.动物模型:144只健康成年Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组、梗死组、6h溶栓组,各48只。6h溶栓组于MCAO模型建立后6h给予r-tPA,对照组的大鼠手术操作方法与模型组相同,只注射生理盐水。 2.自由基活性检测:各组大鼠分别于1,3,7d天灌注取脑,严格按照试剂盒说明书分别检测各组大鼠皮层脑组织各个时间点NO、MDA含量,NOS、SOD活性变化。 3.形态学观察:各组大鼠于造模成功后24 h后行灌注取材,HE染色,光学显微镜观察各组大鼠皮层脑组织神经元变化。 4.免疫组织化学检测:免疫组织化学二步法检测神经源型一氧化氮合酶(nNOS)及Caspase-3活性的表达。 结果: 1.各组大鼠自由基活性同一时间点比较,梗死组、6h溶栓组NO、MDA含量、NOS活性均较对照组升高(P均<0.05),但6h溶栓组较梗死组NO、MDA含量、NOS活性升高幅度低(P均<0.05),差异有统计学意义。 2.各组大鼠自由基活性同一时间点比较,梗死组、6h溶栓组SOD活性均较对照组降低(P<0.05),但6h溶栓组SOD活性较梗死组降低的幅度小(P<0.05),差异有统计学意义。 3.各组比较,梗死组、6h溶栓组nNOS的表达较对照组升高(P<0.05),但6h溶栓组nNOS的表达较梗死组升高的幅度小(P<0.05),差异有统计学意义。 4.各组比较,梗死组、6h溶栓组Caspase-3的表达较对照组升高(P<0.05),但6h溶栓组Caspase-3的表达较梗死组升高的幅度小(P<O.05),差异有统计学意义。 结论: 超时间窗溶栓治疗仍可通过减轻NOS的的活性而使NO合成减少,从而减轻溶栓后的氧化应激导致的脑损伤,并可通过降低凋亡分子Caspase-3活性而减少细胞凋亡。