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目的:探讨化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)和顺式顺铂(CDDP)对人类肝癌细胞(Human hepatoma,HepGⅡ)刺激后生成活性氧家族(reactive oxygen speices,ROS)对细胞存活率的影响,及ROS的生成与低氧诱导因子-1a(hypoxia induciblefactor-1a,HIF-1a)之间关系的研究。
方法:用四甲基偶氮唑蓝方法(MTT法--检测细胞增殖的方法)分析检测在不同浓度的5-FU和CDDP刺激16小时后HepGⅡ细胞的存活率;分析检查不同浓度的thiourea和biypridyl[羟自由基(hydroxyl radical,OH·)的捕获剂和阻断剂]刺激17小时后HepGⅡ细胞的存活率:药物避光刺激后,用ROS荧光探针标记,在荧光显微镜下目测ROS是否生成;用流式细胞仪定量检测ROS的生成;用Western Blot方法从蛋白水平上检测ROS与HIF-1a之间的关系。
结果:1.化疗药物单独用药检测到生成ROS增多;2.化疗药物联合用药较单独用药生成的ROS多;3.化疗药物联合用药较单独用药在蛋白水平上生成的HIF-1a多:4.Thiourea和biypridyl预处理后导致ROS的生成减少。5.化疗药物联合用药检测到生成ROS的种类有H2O2、O2-。6.Thiourea和biypridyl加入到化疗药物中,导致HIF-1a生成减少。
结论:化疗药物5-FU和CDDP联合用药通过诱导HepGⅡ细胞的ROS生成从而导致HIF-1a在蛋白水平上过表达;而在化疗药物5-FU和CDDP中加入thiourea和biypridyl预处理后,导致HIF-1a生成减少;由此可见,HIF-1a的表达与ROS的生成有关。