【摘 要】
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目的:本研究通过建立小鼠结肠癌爪垫淋巴结转移模型、用逆转录病毒为IL-21DNA 载体转染小鼠结肠癌淋巴结转移细胞、观察能表达IL-21 的结肠癌淋巴结转移细胞的生物学作用,从
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目的:本研究通过建立小鼠结肠癌爪垫淋巴结转移模型、用逆转录病毒为IL-21DNA 载体转染小鼠结肠癌淋巴结转移细胞、观察能表达IL-21 的结肠癌淋巴结转移细胞的生物学作用,从而探讨分泌IL-21 的结肠癌淋巴结转移细胞是否能诱导荷瘤小鼠免疫系统对癌细胞淋巴结转移产生抑制作用。方法:1 淋巴转移模型建立:将小鼠结肠未分化腺癌Colon26 细胞株接种于Balb/C 小鼠爪垫内侧皮下。肿瘤形成后,折颈处死小鼠,于无菌条件下摘取腘窝淋巴结,研磨淋巴结经400 目筛网滤过,将磨碎组织培养于10%胎牛血清RPMI1640 培养基中,观察是否有肿瘤细胞贴壁生长,若有肿瘤细胞贴壁生长,进一步获得肿瘤细胞单细胞克隆细胞株,经免疫组化(CEA,二步染色法)鉴定,命名为Colon26淋巴转移细胞株(Colon26M)。测定Colon26M 细胞株的淋巴转移率,并与Colon26 细胞株淋巴转移率比较是否存在差别。2 表达IL-21 的小鼠结肠癌Colon26M 细胞株构建:以携带IL-21cDNA 的逆转录病毒L XSN 为载体,转染ψ2 包装细胞,使之分泌载有IL-21DNA 的逆转录病毒,然后用该病毒转染PA317 包装细胞,使之分泌大量载有IL-21DNA 的逆转录病毒,然后转染Colon26M 细胞,获得稳定表达IL-21的Colon26M 细胞株,命名为Conlon26M/IL-21 细胞株。按Trizol 试剂盒说明提取Conlon26M/IL-21 细胞株总RNA,并
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