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背景和目的 实体肿瘤的生长和转移依赖于肿瘤间质中血管的生成，许多血管生成因子在肿瘤中均有表达，介导血管生成。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是目前所知的作用最强的促血管生成因子之一，它可直接或间接地参与血管生成的每一个环节。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)是一种与肿瘤侵袭和转移密切相关的蛋白酶，在肿瘤血管生成过程中参与细胞外基质的降解，也是促进血管生成的重要因子之一。许多研究证实，各种促血管生成因子往往相互作用共同参与肿瘤血管生成，因此，对肿瘤组织中多种血管生成因子共同研究有助于认识肿瘤血管生成的全貌。随着人们对这一领域研究的不断深入，各种以血管生成因子为抑制靶点的肿瘤抗血管生成治疗应运而生，并且在一些肿瘤的临床试验中取得了引人瞩目的疗效。喉癌是耳鼻咽喉科最常见的肿瘤之一，同其它肿瘤一样，其发生、发展乃是机体内外多种致癌因素共同作用的结果，血管生成对于其生长、浸润及转移亦应具有不可忽视的作用。但目前国内外这方面的研究报道不多，且意见不一。本实验通过免疫组化方法检测42例喉癌组织中VEGF、MMP-9的表达及肿瘤微血管计数(microvessel count，MVC)，旨在分析VEGF和MMP-9对喉癌血管生成的影响及两者间可能具有的相关性，同时 浙江大学硕士学位论文探讨VEGF和MMPg与喉癌分化程度及TNM分期等临床生物学行为间的关系，以期为喉癌的预后及抗血管生成治疗研究提供参考。 材料与方法 42例喉癌组织标本均取自浙江大学医学院附属第一医院耳鼻咽喉科 1997年2月一2002年6月间收治的喉癌患者。其中，男性39例，女性3例；年龄40一刀岁，平均57石f7了9岁；所有患者术前均未接受放疗和化疗，术后病理诊断均为喉鳞状细胞癌；高、中、低分化癌分别为 20、17、5例；依 1997年 UICC肿瘤 TNM分类标准：I、11、fll、IV期分别为 9、11、18、4例。 所有组织标本均经 10％中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋，4 u m厚连续切片，采用免疫组化 Envision二步法分别行 VEGF、MMP－9、CD34染色。显微镜下判断染色结果，以肿瘤细胞胞浆内呈现棕黄色判定为VEGF阳性肿瘤细胞。VEGF表达强度参考 Volm Metal的评判标准：在 400倍镜下随机选取 5个视野，分别计算癌巢区阳性肿瘤细胞占全部计数肿瘤细胞的比率，平均值＜25％为＊＊＊F阴性或弱阳性，＞25％为＊＊＊F阳性。＊＊P9染色结果照此判定。＊＊C值计数先在10O倍镜下寻找微血管密集区，然后在200倍镜下计数5个不同视野中的微血管数，单个着色的内皮细胞或内皮细胞丛均按独立的血管分别计数，取其平均值作为1个标本的MVC值。 所有数据均用 SPSS刀 for windows统计软件包在计算机上处理分析。统计方法包括x‘检验、t检验及Fisher’s精确检验。 结 果1．VEGF表达与喉癌血管形成、分化程度及TIM分期的关系 42例喉癌标本中 VEGF阳性者 34例（80二％），其 MVC平均值为 23．85L3．70，VEGF 阴性或弱阳性者 8 例，MVC平均值为 19．63L5．45，两者有显著性差异（P—0．012）。VEGF在高、中、低分化喉癌中的阳性率分别为85．0o（17o0X76．5O（13／17）、80．0O（4／5），各组间无显著性差异（P一0．804）。I、11、Ill、IV期 2 浙江大学硕士学位论文喉癌中 VEGF阳性率分男 66．7o（6／9）、sl．80（9／11）、83．3o（15／18）、100．0o（4／4），各组间无显著性差异（P＝0．531）。2．MMPg表达与喉癌血管形成、分化程度及TIM分期的关系 42例喉癌标本中MMP－9阳性者27例（64．3％），其MVC平均值为24．19f4刀9，MMP－9阴性或弱阳性者 15例，MVC平均值为刀刀0t4．17，两者有显著性差异 （P＝0t021）。MMP－9在高、中、低分化喉癌中的阳性率分另为 55．0o（11／20）、76．5O（13／17）、60．0O（3／5），各组间 无显著性差异（P二0．389），I、11、Ill、IV期喉癌中 MMP－9阳性率分另为 55．6O（5／9）、72．7O（8／11）、61．lO（11／18）、75．0o（3／4），各组间无显著性差异（P。0．82）。3．VEGF表达与MMP－9表达的关系 42例喉癌标本中，VEGF与MMP－9共同阳性者23例，VEGF阳性而MMP－9阴性或弱阳性者 11例，MMPg阳性而 VEGF阴性或弱阳性者 4例，两者均呈阴性或弱阳性者4例，VEGF与MMP司表达间无相关性（－0．425卜 结 论1．VEGF与MMP－9在喉鳞癌中的表达与肿瘤微血管计数（MVC）显著正相关， 二者对肿瘤血管生成起正向调节作用，但作用机制有所不同。2．在42例喉鳞癌组织中，VEGF与MMP－9共同表达者23例，但二者未见显著 相关性，二者之间是否具有协同作用有待于深入研究。3．喉鳞癌组织中存在VEGF与MMP－9高表达，二者可能成为