【摘 要】
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创伤愈合中最关键的过程是创面新生血管的生长,新生的血管床将为创面修复提供各种营养物质和细胞因子.加快创伤早期新生血管的生长对减少瘢痕组织形成和感染的发生有重大意义
【出 处】
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上海第二医科大学 上海交通大学医学院 上海交通大学
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创伤愈合中最关键的过程是创面新生血管的生长,新生的血管床将为创面修复提供各种营养物质和细胞因子.加快创伤早期新生血管的生长对减少瘢痕组织形成和感染的发生有重大意义,并将最终影响到预后外观和肢体功能恢复.该实验用基因工程方法改造成纤维细胞,筛选出能够持续分泌hVEGF(人血管内皮细胞生长因子)的细胞株,将该细胞种植于合适的细胞载体,制成基因工程生物膜,为难于愈合创面(如糖尿病性慢性溃疡)的治疗提供了有效方法.该实验将含有hVEGF的穿梭质粒pCDNA3-hVEGF导入NIH3T3细胞,使周G-418根据极限稀释法筛选出7个单克隆细胞株.从中挑选出整合有hVEGF基因且表达hVEGF最高的一个细胞克隆在DNA水平,mRNA水平和蛋白质的表达水平进行鉴定,同时使用MTT,鸡胚实验检测表达产物的生物学活性.结果显示:PCR和SouthernBlot证明hVEGF基因已整合入NIH-3T3细胞基因组,RT-PCR和Northem Blot则表明该细胞株能够表达hVEGF-mRNA.hVEGF-ELlsA 证实在蛋白质水平该细胞株能够持续表达hVEGF个月以上,并始终保持非常高的水平.在此基础上,将该细胞种植于三种生物膜(甲壳素,丝素膜和Biobrane),并比较其在此三种生物膜上的生长情况.结果显示:Biobrane为最适支持物.进一步检测发现:该工程细胞不仅可以在Biobrane上良好生长,而且仍旧能够表达高水平的hVEGF.同时绘制了该细胞在Biobrane上的生长曲线,得到它在Biobrane上生长状况的定量指标,如单位面积Biobrane上细胞数为5×10<5>-1× l0<6>/1.77cm<2>时生长状态最佳,单位面积Biobrane所能容纳的最大细胞数()等等,这些工作为今后应用于临床提洪了理论依据.
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