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良性前列腺增生症(benign prostatic hyperplasia,BPH)是常见的老年男性病,大约有80%老年男性的生活质量因此受到严重影响,5α-还原酶对BPH的形成起着重要作用。本文以5α-还原酶的抑制率为指标,研究确定了油茶蒲中抑制5α-还原酶活性成分的分离纯化方法,采用细胞模型和动物实验探究了活性成分对BPH的作用,为开发高效低毒的BPH治疗药物提供理论依据。主要的研究内容和结果如下：(1)优化5α-还原酶活性的紫外分光光度检测法,以睾酮(T)替代传统的NADPH作为检测对象,测定方法为：2mL测活体系中T20μmol/L,NADPH40μmol/L,酶提取物260μg,37℃测定4min内248nm处的吸光度值。该法检测结果与高效液相色谱法(HPLC)相当。(2)建立油茶蒲活性成分的提取、纯化、精制及制备方法：ⅰ)活性成分的提取：选择50%7,醇(v/v)作为提取溶剂,该醇提物对5a-还原酶的抑制率为36.31%4±2.76%,得率11.96%。ⅱ)活性成分的纯化：选择AB-840%乙醇洗脱相(OCE)作大孔树脂柱层析条件,OCE对5a-还原酶抑制率为57.79%±1.67%,得率26.5%。ⅲ)活性成分的精制：以正丁醇-甲醇-水-冰醋酸(3：2：2：1)为展开剂,0.5%(w/v)FeCl3乙醇溶液为显色剂,应用聚酰胺色谱法代替硅胶色谱法得到分离度良好的Fr1-Fr7流份(见P37图3.1),Rf为0.85～0.0375,其中Fr6、Fr5、Fr4对5α-还原酶的抑制率分别为85.38%±3.71%、76.28%±1.37%、73.01%±2.93%,较纯化前OCE的抑制率显著增加(p<0.01),得率分别为3.79%、2.10%、0.64%。明确了油茶蒲的特征酚类物质没食子酸、鞣花酸及MEAG不是抑制5α-还原酶活性的关键化合物。ⅳ)关键化合物的制备：采用半制备HPLC分离Fr5得到活性单体F0和F0’,对5α-还原酶的抑制率分别为76.47%4±0.02%和92.08%±0.18%,对应得率为5.17%和1.19%,由LC-MS推测出F0和F0’的分子量分别为449和335。(3)采用MTT法和Annexin V/PI双染色法测定油茶蒲活性成分抑制人良性前列腺增生细胞BPH-1增殖和诱导细胞凋亡作用。在浓度为50μg/mL时,抑制增殖作用的强弱顺序为Fr6>非那雄胺>Fr5≈F0>Fr4≈Fr3>OCE>Fr2,其中Fr6抑制活性最高(抑制率50.0%±0.7%),Fr5和FO次之(抑制率分别为43.7%±2.1%和41.4%±2.1%),且抑制作用呈时间-剂量依赖性。F0诱导细胞凋亡作用呈剂量依赖性,Fr6在浓度为25μg/mL时诱导的细胞凋亡率为12.1%±3.8%,与非那雄胺的效果相近,极具研究和开发价值。(4)油茶蒲活性成分对BPH-1细胞增殖的抑制作用,与其对5α-还原酶活性的抑制作用结果一致,证实了油茶蒲活性成分作为5α-还原酶抑制剂对改善前列腺增生的有效性。(5)油茶蒲醇提物能有效改善丙酸睾酮致大鼠前列腺增生症状,显著降低大鼠前列腺和腹叶指数(p<0.05),改变增生组织病理学形态,抑制大鼠前列腺内5α-还原酶和酸性磷酸酶的活性(p<0.01),并提高大鼠体内的抗氧化水平。综上所述,油茶蒲活性成分可通过降低5a-还原酶活性、抑制前列腺细胞增殖、诱导细胞凋亡、清除自由基等多个靶点的作用,有效预防并治疗BPH。