乙醇对雄性小鼠生殖力的影响

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目的:探讨乙醇对小鼠生育力的影响,间接反映酒精对男性生育力的影响,为男性不育的预防和治疗提供科学依据。方法:实验选用7~12周龄雄性健康昆明小鼠50只,体重25g~30g,随机分为5组,每组10只,分别为对照组,试验组(4组)。根据每天灌喂乙醇的量,将试验组分成0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml四组。小鼠预饲1周后开始灌喂给药,每日1次。试验于小鼠灌胃的第4,第8,第12天进行切片制作、HE染色、生精细胞凋亡的凝胶电泳法检测、TUNEL法定量检测生精细胞凋亡、以及Bc1-2/Bax免疫组织化学试验。结果:⑴对照组和0.1ml/kg组小鼠睾丸组织结构发育正常,生精上皮完整。0.2ml/kg组曲精小管上皮细胞层数未见显著减少,初级生精细胞和次级生精细胞结构疏松,但生精上皮基本能保持完整。0.3ml/kg组曲精小管上皮细胞层数亦未见减少,初级生精细胞和次级生精细胞结构被破坏,精原细胞数目极度减少,核形态不规则。0.4ml/kg组睾丸组织结构已出现严重受损,曲精小管生精上皮已从基膜上脱落、与结缔组织分离,初级生精细胞和次级生精细胞的结构完全被破坏,上皮细胞分层不可辨;精原细胞消失,次级精母细胞和精子细胞细胞核体积明显减小,形态不规则,管腔中无精子。⑵睾丸组织生精细胞凋亡DNA特征性梯状带的检测在第4d和8d时,对照组、0.1ml/kg组、0.2ml/kg组、0.3ml/kg组、0.4ml/kg组均未见凋亡的特征性梯状条带;而在第12d时,对照组和0.1ml/kg组没有检测出特征性梯状条带,溶剂组检测出明显的特征性梯状条带。⑶T UNEL法定量检测生精细胞凋亡,第4天时,0.3ml/kg组、0.4ml/kg组的生精细胞凋亡指数较对照差异显著(P<0.05);第8天时0.2ml/kg组和0.3ml/kg组的生精细胞凋亡指数较对照组差异显著(P<0.05),0.4ml/kg组的生精细胞凋亡指数较正常组和阴性组差异极显著(P<0.01);第12天时,0.3ml/kg组、0.4ml/kg组较正常组的生精细胞凋亡指数差异显著(P<0.05),其中第8天0.4ml/kg组在所得实验数据中最高达到0.4,为实验数据中最大值。⑷乙醇对雄性小鼠睾丸生精细胞凋亡调控基因Bax和Bcl-2蛋白表达,随着乙醇浓度的升高阳性表达面积增大,呈现一定的剂量-效应关系,随着乙醇浓度的增加灰度值降低。随着乙醇浓度的增加阳性表达面积比降低,乙醇各浓度组灰度值均比对照组低,但是比较差异不显著(P>0.05),说明高剂量的乙醇会使Bcl-2蛋白的表达浓度减少。结论:持续高剂量的乙醇能够诱导促凋亡基因Bax蛋白的表达,阻止抑制凋亡基因Bcl-2蛋白的表达,持续高剂量的乙醇能够诱发睾丸生殖细胞的凋亡,以致损伤小鼠的生殖能力。
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