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【目的】研究C/GP-NgR抗体水凝胶接种人脑源性神经营养因(Human Brain DerivedNeurotrophic Factor, hBDNF)基因修饰鼠骨髓间质干细胞(Rat Mesenchymal StemCells,rMSCs)的细胞生长状态及两者间生物相容性。【方法】1.rMSCs的培养与鉴定。全骨髓细胞贴壁法在培养板上培养SD大鼠rMSCs,倒置相差显微镜观察rMSCs细胞形态学,流式细胞仪测rMSCs表面抗原标记。2.C/GP-NgR抗体水凝胶的制备与鉴定。用抗体氧化接枝法制备C/GP-NgR抗体水凝胶,ELISA法测水凝胶C/GP-NgR抗体水平。3.hBDNF基因修饰rMSCs的培养与鉴定。将携带EGFP标志基因和hBDNF目的基因的5型复制缺陷型腺病毒(Ad5-hBDNF-EGFP),转染三代的rMSCs,倒置荧光显微镜观察rMSCs荧光表达。4.hBDNF基因修饰rMSCs接种C/GP-NgR抗体水凝胶联合共培养。实验分组:对照组(rMSCs接种于C/GP水凝胶组);hBDNF组(hBDNF修饰rMSCs接种于C/GP水凝胶);NgR接枝组(rMSCs接种于C/GP-NgR抗体水凝胶);hBDNF+C/GP-NgR组(hBDNF修饰rMSCs接种于C/GP-NgR抗体水凝胶);在培养板内共培养吖啶橙染色法观察rMSCs生长状态,WST-1法检测rMSCs增殖活性,realtime-PCR检测hBDNFmRNA的表达,Western blot检测hBDNF蛋白水平。【结果】1.成功提取、分离、培养rMSCs。培养5天后细胞形态较为均一,多呈长梭形,之后细胞迅速增殖,7-10天细胞融合,传至第三代,细胞呈均一梭状生长。流式细胞仪检测CD34、 CD45表达阴性,CD29、CD90表达阳性,符合骨髓间充质干细胞的表型。2.在室温条件下C/GP液态胶可长时间保持透明清亮均质溶液,37℃后成透明胶冻样凝胶;室温下C/GP溶液的PH值平均为7.2;NgR抗体接枝C/GP水凝胶ELISA鉴定,各组的吸收光度值分别为:液态胶氧化抗体混合组0.669±0.235、固态胶氧化抗体组0.700±0.045、无抗体水凝胶组0.396±0.078。与无抗体水凝胶组相比,前两组NgR抗体水平显著增高(P<0.05);液态胶氧化抗体混合组与固态胶氧化抗体组相比的NgR抗体水平无明显差别(P>0.05)。3.Ad5-hBDNF-EGFP转染rMSCs3天后,感染复数(MOI)呈倍数递增,rMSCs荧光表达增强。4.rMSCs接种于C/GP-NgR抗体水凝胶,培养24小时于凝胶上可见细胞生长,7天后可见胶上细胞增多,并互相汇合,呈梭状或纤维状生长;吖啶橙染色可见细胞核呈绿色,未出现橘红色固缩状细胞,表明细胞呈活性状态。5.WST-1法检测rMSC生长:接种于凝胶上的rMSCs呈时效性增殖,第三天细胞数显著增加;3-5天细胞生长最快,7天生长减慢。培养第5天hBDNF+C/GP-NgR组与对照组、hBDNF组、NgR接枝组相比细胞增殖明显增加(P<0.05)。6.RT-PCR:对照组hBDNFmRNA表达阴性;与对照组相比hBDNF组、hBDNF+C/GP-NgR组hBDNFmRNA表达显著增加(P<0.01);与hBDNF组相比,hBDNF+C/GP-NgR组hBDNFmRNA表达显著增加(P<0.05)。Western blot:对照组hBDNF蛋白表达阴性;与对照组相比hBDNF组、hBDNF+C/GP-NgR组hBDNF蛋白表达显著增加(P<0.01);与hBDNF组相比,hBDNF+C/GP-NgR组hBDNFmRNA表达显著增加(P<0.05)。【结论】1. hBDNF-rMSCs在C/GP-NgR抗体凝胶中可良好存活、增殖、表达hBDNF。2. hBDNF-rMSCs与C/GP-NgR抗体凝胶有良好的生物相容性。