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全文主要研究两个方面的问题:1、应用荧光光谱法和紫外-可见光谱法研究了中药有效成分与牛血清白蛋白(BSA)间的相互作用,以及在发生作用过程中所体现出的构效关系和金属离子存在时对相互作用体系的影响;2、根据荧光共振能量转移理论,探讨了两对能够产生能量转移的染料体系,并利用各自体系的性质用于物质的定量分析。
第1章:首先从药动学、药理学、药物设计及中药现代化等方面阐述了研究药物小分子与血清白蛋白相互作用的意义,总结了研究药物与蛋白质相互作用的常见方法和研究内容及在各领域中的应用;其次,介绍了荧光共振能量转移现象产生的原理及选择能量转移染料对的条件,综述了荧光共振能量转移法对有机小分子、生物大分子及无机离子进行定量分析的应用。
第2章:从天然中药雷公藤中提取分离雷公藤总生物碱(TAT),应用荧光光谱法研究了其与BSA间的相互作用,解释了TAT对BSA的荧光发射光谱猝灭的现象。实验表明,TAT对BSA的荧光猝灭作用是一个静态猝灭过程,计算了相互作用体系在25℃和37℃时的猝灭常数及热力学参数。研究还表明,体系酸度和离子强度的变化将影响TAT与BSA间的相互作用。
第3章:应用荧光光谱法和紫外-可见吸收光谱法研究了穿心莲内酯(ANDRO)与BSA之间的相互作用。实验表明,ANDRO对BSA的荧光猝灭作用是一种静态猝灭过程,在生理条件下二者约以l:l的摩尔比相结合形成复合物。求算了相互作用体系中给体与受体问的距离,并给出体系热力学参数。最后利用相互作用体系的同步荧光光谱探讨了ANDRO对BSA构象的影响,并讨论了几种金属离子对ANDRO-BSA相互作用体系的影响。
第4章:三种黄酮类小分子桑色素(MOR)、槲皮素(QUE)、芦丁(RUT)与BSA相互作用的后紫外-可见光谱和荧光猝灭光谱的不同变化,反映出了三种结构不同的小分子中差异基团对与BSA相互作用的构效关系。通过对实验光谱的解析,发现黄酮母核B环上的羟基处于相邻位置时,比处于其他位置时表现出的对BSA猝灭作用和结合作用更强,而有较大取代基团存在时,由于位阻较大,黄酮类小分子与BSA间的猝灭作用及结合作用则明显变弱。
第5章:讨论了黄酮类小分子(MOR、QUE、RUT)-BSA-Cu2+体系的荧光光谱变化,实验结果表明,Cu2+的加入扩大了三种黄酮小分子与BSA作用的疏水区域,表现出MOR、QUE和RUT可以与BSA发生进一步的荧光猝灭,同时伴随着荧光光谱的紫移。由于三种黄酮小分子结构上的差异,当Cu2+浓度由低到高的变化时,BSA荧光猝灭和它们与BSA结合的性质也发生了不同的变化。通过紫外-可见光谱的分析可知三种小分子会与Cu2+和BSA形成三元复合物,但形成过程中还伴随二元物质的出现。
第6章:研究了钙黄绿素(CA)-荧光桃红(PH)体系的荧光共振能量转移机理,及其在蛋白质测定中的应用。实验表明,在聚乙烯醇存在下,于pH=5.30的Hac-NaAc缓冲溶液巾,CA与PH之间能发生有效的能量转移。根据Forster理论,探讨了CA与PH分子间能量转移机理。蛋白质的加入使CA-PH体系发生荧光猝灭,而且蛋白质的浓度与体系的荧光猝火强度在一定范围内有良好的线性,据此建立了CA-PH-BSA体系测定蛋白质的新方法。在优化条件下,BSA的线性范围为0.4~84mg/L,检出限为0.197mg/L(n=1l)。方法应用于人血清样品中蛋白质含量的测定,其RSD<2%(n=6),回收率为96.88%~102.10%。
第7章:研究了水杨基荧光酮(SAF)-罗丹明B(RHB)体系的荧光共振能量转移机理,结合偏最小二乘法同时测定钢样中铬(Cr)、锰(Mn)、钼(Mo)。实验表明,在十六烷基三甲基溴化铵胶束水溶液中,SAF与RHB间能发生有效的荧光共振能量转移,并讨论了SAF与RHB分子问能量转移机理。通过偏最小二乘法对Cr(VI)、Mn(VⅡ)、Mo(IV)加入后能量转移体系光谱信号的改变进行解析,实现了该体系对三种金属的同时测定。结果表明,在优化实验条件下,Cr(VI)、Mn(VⅡ)、Mo(IV)分别在O.14~1.3mg/L、O.1~0.95mg/L、O.13~1.26mg/L范围内整个光谱均呈现出线性变化。检出限(n=11)分别为0.08mg/L、0.09mg/L、0.09mg/L。模拟样品和实际样品测定精密度RSD在3%以下,模拟样品测定回收率在94.01%~107.46%之间,对钢样的测定结果均在建议含量范围之内。