高效液相色谱法同时测定血浆吲哚及3-甲基吲哚的方法学研究及应用

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目的:1.建立一种快速、灵敏的高效液相色谱-荧光检测(High performance liquid chromatography-fluorescence detection,HPLC-FD)法同时测定血浆吲哚(2,3-benzopyrrole,Indole)与3-甲基吲哚(3-methylindole,Skatole)浓度。2.用所建立的方法测定正常孕妇,妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者和妊娠合并乙肝患者血浆中吲哚和3-甲基吲哚的含量,从而探讨妊娠期间,孕妇在生理和病理状态下血浆中吲哚类代谢物的变化。方法:1.采用Shim-Pack VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm;4.6μm)分离,以甲奈酚(1-Naphthol)为内标(internal standard,IS)。流动相为15 mmol/L磷酸二氢钠溶液-甲醇(40:60,v/v);流速0.8 ml/min;柱温30℃;进样量:50μL;激发光波长(λex)和发射光波长(λem)分别为274 nm和340 nm;分析时间10.5min。2.利用该方法测定正常孕妇(n=46),GDM患者(n=44)和妊娠合并乙肝血浆(n=29)中吲哚和3-甲基吲哚的含量。结果:1.吲哚,is和3-甲基吲哚保留时间分别为6.03,8.70,9.62min。吲哚和3-甲基吲哚线性范围分别为:2.22~88.89μg/l,1.11~44.4μg/l,最低检测限分别为:0.11μg/l和0.06μg/l。2种物质的平均回收率为95.5﹪~112.3﹪,日内和日间变异系数均小于6.8﹪。2.与正常对照组相比,gdm患者血浆中吲哚和3-甲基吲哚浓度均显著性升高(p<0.05)。3.在gdm患者中,胰岛素抵抗亚组血浆吲哚浓度低于胰岛素非抵抗组3.48倍(p<0.05)。胰岛素抵抗患者3-甲基吲哚水平高于非胰岛素抵抗患者,但差异无统计学意义(p>0.05)。4.控制基础变量年龄后,吲哚浓度与胰岛素抵抗指数(homa-ir)呈负相关(r=-0.306,p<0.05)。5.妊娠合并乙肝患者血浆吲哚和3-甲基吲哚浓度高于正常对照组1.0倍和0.75倍(p<0.005),两组间的差异具有统计学意义。6.在妊娠合并乙肝组中,吲哚分别与alt(r=0.620,p<0.001),ast(r=0.665,p<0.001),alb(r=0.561,p=0.002)呈显著正相关,3-甲基吲哚与alt(r=0.704,p<0.001),ast(r=0.744,p<0.001)呈强相关。7.logical回归分析提示吲哚与3-甲基吲哚是妊娠过程中并发乙肝的危险因子(优势比or=1.210,95%ci:1.040–1.408,p<0.05;or=4.56,95%ci:1.57-13.21,p<0.05)。结论:1.本文建立了一种HPLC-FD法同时检测血浆中吲哚和3-甲基吲哚含量,该方法具有快速,灵敏,简便的特点,适用于临床检测和实验室研究。2.本研究发现孕妇在病理条件下均存在不同程度的吲哚类物质浓度的改变。在GDM患者中吲哚水平与HOMA-IR呈负相关。妊娠合并乙肝患者吲哚类代谢物浓度与肝损伤指标AST和ALT水平呈正相关。
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