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目的:慢性乙型肝炎已经成为了一个全球性的健康问题,目前全世界已经有超过3.5亿人受累及。乙型肝炎病毒慢性感染的免疫机制研究在近几年成为了研究热点,尤其是Treg细胞在慢性乙肝中的作用越来越受到了关注。FOXP3蛋白在介导炎症反应中起重要作用,并能够抑制白介素-23/白介素-17A(IL-23/IL-17A)信号通路的活性。已有研究表明,调节性T细胞(FOXP3~+Treg细胞)和产生IL-17A的辅助性T细胞(Th17细胞)分别在乙型肝炎中起重要作用。Treg细胞和Th17细胞从起源上就存在着密不可分的关系,那么在慢性乙肝感染过程中,Treg细胞与Th17细胞的的重要信号途径IL-23/IL-17A途径之间是否存在相互作用,目前尚不可知。在本课题中,我们拟阐述FOXP3~+ Treg细胞及IL-23/IL-17A分泌途径在乙型肝炎中的作用以及二者之间在乙肝中的相互关系。方法:收集24例正常人(HC)、56例慢性乙肝患者(CHB)及39例慢性乙肝急性发作患者(ACLF)的外周血及肝组织。另外收集了38例慢性乙肝患者经替比夫定治疗52周过程中的5个时相点的外周血。流式细胞术(FCM)检测FOXP3~+CD4~+T细胞及IL-17A~+CD4~+T细胞频率在HC、CHB及ACLF患者外周血中的变化;采用实时定量PCR(Q-PCR)、ELISA及Western blot技术检测肝组织及外周血中的FOXP3及IL-23/IL-17A信号途径相关炎症因子的表达,免疫组化及荧光共聚焦检测FOXP3在肝组织内的表达与定位,Q-PCR检测血清HBV DNA水平,ELISA检测血清中乙肝表面抗原(HBsAg)浓度及Th17细胞相关细胞因子,全自动生化仪检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。结果:CHB患者外周血中的FOXP3 mRNA表达水平及FOXP3~+CD4+T细胞频率明显高于正常人。FOXP3主要表达在CD4+T细胞上。肝组织内的FOXP3 mRNA水平在CHB组及ACLF组中也明显高于HC组,且与患者血清中的HBV DNA水平及乙肝表面抗原(HBsAg)浓度明显呈正相关。在替比夫定治疗慢性乙肝的52周过程中,FOXP3 mRNA的表达水平在治疗的前12周快速下降,之后随着治疗的继续而缓慢回升。与HC组相比,CHB患者外周血中的IL-17A~+CD4~+T细胞频率及肝脏内的IL-23/IL-17A信号通路相关的促炎因子也明显升高,产生IL-17A的CD4~+T细胞同时表达IL-23受体。当患者血清中的HBsAg浓度高于1×10~4 IU/ml时,IL-23/IL-17A的表达与HBsAg明显正相关。CHB患者肝脏内FOXP3 mRNA表达水平升高与IL-23/IL-17A及其相关炎症因子的表达呈正相关关系。在慢性乙肝患者经替比夫定治疗的52周过程中,乙肝患者外周血中的HBV DNA病毒载量及HBsAg水平急剧下降,其IL-23/IL-17A的表达也呈持续性逐步下降趋势,与FOXP3 mRNA的变化趋势在治疗的前12周相似,但在治疗的中后期,二者却是相反的变化趋势。结论:在未经治疗的慢性乙肝感染中,患者体内FOXP3 mRNA明显高表达,而在替比夫定治疗之后,FOXP3 mRNA则快速下降,这些结果说明了增多的FOXP3~+ Treg细胞抑制了肝脏内的有效的抗病毒免疫,维持了HBV病毒在体内的持续性感染。替比夫定治疗的中后期,FOXP3 mRNA缓慢回升,这可能是Treg细胞与恢复的抗病毒免疫之间保持的一种平衡,避免过激的抗病毒免疫继续损伤肝细胞。IL-23/IL-17A信号通路的活性在CHB及ACLF中明显升高,且在替比夫定治疗的52周过程中,呈持续性下降,证明了Th17细胞在慢性乙肝的致炎过程中起重要作用。血清HBsAg在达到一定浓度时,能够诱导IL-23和IL-17A的产生,加剧了肝脏内的炎症程度。HBV感染的肝组织内FOXP3 mRNA的高表达与IL-23/IL-17A信号通路的活性升高呈明显的正相关关系,这个结果说明了,在乙肝的慢性感染过程中,Treg细胞的抑制功能可能不足以有效地抑制IL-23/IL-17A信号通路的活化,这可能也是维持HBV病毒持续性感染的一个机制。在替比夫定治疗的中后期,患者血清中的HBV病毒载量及HBsAg维持在较低水平,FOXP3~+ Treg细胞的逐步增加可能也抑制了Th17细胞的活性,进一步抑制了一些炎症因子的产生,使患者的炎症反应得到了缓解。由于这部分工作中没有进行机制研究,所以FOXP3与IL-23/IL-17A信号通路之间的双向调节机制还有待于后期工作的进一步确认。