拟南芥突变体TRANSPARENT TESTA GLABRA3基因定位与克隆鉴定

来源 :鲁东大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiangnanshen
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拟南芥作为模式植物,一直是研究植物各种机制的主要材料。课题组在用拟南芥生态型Columbia(Col-0)转基因(Annat2Pro-GUS)的过程中获得突变体TRANSPARENT TESTA GLABRA3(ttg3),经过筛选后得到纯合体。突变体ttg3具有晚花,耐旱和果荚长等特点,这些性状在花卉产业和作物生产研究中具有重要意义。突变体ttg3植株与拟南芥野生型Col-0相比,表型差异主要包括:ttg3植株叶片表皮毛少,甚至无表皮毛、莲座叶多、开花时间晚、花朵大、种皮无色、果荚长,此外,植株还表现出耐盐和耐旱等特点。表型遗传分析发现,表皮毛、花大小、开花天数和种皮颜色是由隐性基因控制,且表型分离符合孟德尔遗传定律。筛选分子标记,利用图位克隆法将ttg3突变位点初步确定到拟南芥五号染色体上,且在分子标记A21(2,476,150)与NGA139(8,428,133)之间约5 M区域。依据初步定位结果,克隆突变体ttg3基因送公司测序,序列比对结果发现突变基因在8,358,391-8,400,311之间序列缺失,通过在预测区域两端设计引物验证,最终确定突变区间位于五号染色体上8,358,383-8,400,274间41 kb的区域。根据定位结果,利用TAIR网(https://www.arabidopsis.org/)公布数据对定位区域进行分析,发现9个候选基因:AT5G24470、AT5G24480、AT5G24490、AT5G24500、AT5G24510、AT5G24520、AT5G24530、AT5G24540、AT5G24550,其中AT5G24520是已经报道的TTG1基因,AT5G24540和AT5G24550是同源基因。依据基因编码区序列,设计引物克隆候选基因,构建转化载体后,利用农杆菌浸染法进行遗传转化,经验证获得纯化株系后进行表型鉴定,发现过量表达的AT5G24500转基因植株莲座叶变少,开花天数变短,与ttg3突变体植株晚花性状互补。本实验将会为研究ttg3基因在调控植物生长发育过程中的关键作用奠定基础。
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