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1研究背景和目的食管癌是世界上最常见的六大恶性肿瘤之一,中国是世界上食管癌发病率和死亡率最高的国家。由于缺乏特异性强、敏感度高和经济简便的早期诊断和高危人群筛查指标和方法,临床上初次就诊的患者中,90%以上均为中、晚期患者,预后极差,5年生存率仅为10%左右。肿瘤的早中晚分期、分化程度、淋巴结转移等被认为是影响食管癌预后的主要因素。肿瘤细胞的浸润侵袭和恶性转移则是导致食管癌复发和死亡的主要原因。但是临床上经常发现肿瘤组织分化程度或TNM分期与预后不一致的现象,即组织分化程度较高的患者预后并不一定比分化差的患者好,属于同一TNM分期的患者可能具有明显不同的预后,提示单纯从形态学的改变判断患者预后,存在一定的主观和客观局限性。很显然,进一步阐明这些患者的分子变化特征,寻到与预后的相关因子,提前判断预后,及时指导是食管癌术后个体化综合治疗对提高患者的生存率有重大意义。CTTN蛋白(cortical actin binding protein)简称cortactin,位于染色体11q13区上的CTTN基因所编码的蛋白,最初作为致癌的酪氨酸蛋白激酶v-src的底物而被鉴定发现,与微丝激动蛋白和致癌性酪氨酸激酶v-Src结合,而影响细胞的运动性、侵袭性、突触发生、吞噬以及肿瘤转移灶形成。但是至今CTTN的表达与食管癌预后的关系仍未见报道,本课题通过免疫组化方法分析CTTN在361例食管癌组织中的表达情况,结合临床参数,探讨CTTN与食管癌预后的关系,以期建立食管癌患者预后的分子指标,进而指导个体化治疗。2材料与方法2.1研究对象食管癌组织：361例食管癌手术切除标本组织绝大部分来自于河南、河北、山西等食管癌高发地区医院收治的肿瘤患者,且经病理诊断证实为食管鳞癌。其中男性239例(平均年龄为58±8岁,年龄范围为38-78岁),女性122例(平均年龄为59±7岁,年龄范围为41-74岁)。2.2组织处理组织标本经85%酒精固定,常规脱水后石蜡包埋,4μm连续切片3张,一张无水酒精固定作HE染色进行组织病理诊断,核实组织病理学诊断,一张用于免疫组织化学染色,一张备用。2.3免疫组织化学免疫组织化学采用pv9000试剂盒检测食管癌组织中CTTN蛋白的表达。一抗为兔抗人CTTN蛋白多克隆抗体,浓度1:400。免疫蛋白阳性着色主要定位于正常上皮主要为胞浆染色,肿瘤染色则分布于胞浆或胞膜,为棕黄色。定性：根据免疫阳性细胞染色程度设定：组织未见染色的为阴性(-)；全部细胞轻度染色或染色程度虽为中强度但细胞比例少于25%的为阳性Ⅰ级(弱阳性)(+)；全部细胞中度染色或有25-50%的细胞染色程度深者为阳性Ⅱ级(++)；50%以上的细胞染色程度深者为阳性Ⅲ级(强阳性)(+++)。2.4随访对所有研究病例进行术后跟踪随访,随访截止时间为2010年12月。全部得到完整随访资料(包括：性别、年龄、病理诊断、淋巴结转移、临床分期、浸润程度、分化程度、TNM分期、肿瘤部位、手术时间、随访时间、健康状况等)。其中死亡146例,死因均为肿瘤复发和转移。2.5统计学分析统计学分析采用SPSS17.0统计软件,组间比较采用卡方检验,相关性采用Kruskal-Wallis检验(包括：性别、年龄、浸润程度、淋巴结转移、分化程度、肿瘤部位、肿瘤分型、临床分期等),生存分析采用Kaplan-Meier乘积限法分析。检验标准取a=0.05。3结果3.1性别分组CTTN的表达男性239例(66%,239/361)：阴性8%(20/239)、弱阳性36%(85/239)、阳性30%(72/239)、强阳性26%(62/239)；女性122例(34%,122/361)：阴性10%(12/122)、弱阳性27%(33/122)、阳性34%(41/122)、强阳性29%(36/122)。CTTN表达与性别无相关性(P>0.05,P=0.327)。3.2不同年龄组CTTN蛋白表达<45岁组14例(4%,14/361)：阴性21%(3/14)、弱阳性36%(5/14)、阳性43%(6/14)、强阳性0%(0/14);45-55岁组106例(29%,106/361)：阴性9%(10/106)、弱阳性26%(28/106)、阳性38%(40/106)、强阳性26%(28/106)；55-65岁组161例(45%,161/361)：阴性11%(12/161)、弱阳性35%(52/161)、阳性31%(47/161)、强阳性23%(50/161)；>65岁组79例(22%,79/361)：阴性9%(7/79)、弱阳性41%(32/79)、阳性25%(20/79)、强阳性25%(20/79)。CTTN表达与年龄无相关性(P>0.05,P=0.064)。3.3家族史阳性/阴性患者CTTN蛋白表达361例患者中共有256例有家族史的记录,其中：家族史阳性104例(41%,104/256):阴性9%(9/104)、弱阳性32%(33/104)、阳性27%(28/104)、强阳性33%(34/104);家族史阴性152例(59%,152/256)：阴性12%(18/256)、弱阳性26%(39/256)、阳性32%(48/256)、强阳性31%(47/256)。CTTN表达与家族史阴、阳性无相关性(P>0.05,P=0.914)。3.4肿瘤类型分组CTTN的表达溃疡型80例(22%,80/361)：阴性14%(11/80)、弱阳性24%(19/80)、阳性30%(24/80)、强阳性32%(26/80)；髓质型187例(52%,187/361)：阴性8%(15/187)、弱阳性37%(69/187)、阳性33%(62/187)、强阳性22%(41/187)；缩窄型31例(9%,31/361)：阴性7%(2/31)、弱阳性36%(12/31)、阳性26%(8/31)、强阳性29%(9/31)；蕈伞型63例(17%,63/361)：阴性6%(4/63)、弱阳性29%(18/63)、阳性30%(19/63)、强阳性35%(22/63)。CTTN表达与肿瘤类型无相关性(P>0.05,P=0.305)3.5肿瘤部位分组CTTN的表达食管上段45例(12%,45/361)：阴性13%(6/45)、弱阳性27%(12/45)、阳性38%(17/45)、强阳性22%(10/45)；食管中段275例(76%,275/361)：阴性7%(20/275)、弱阳性36%(100/275)、阳性29%(80/275)、强阳性27%(75/275)；食管下段41例(12%,41/361)：阴性15%(6/41)、弱阳性15%(6/41)、阳性39%(16/41)、强阳性32%(13/41)。CTTN表达与肿瘤部位无相关性(P>0.05,P=0.601)。3.6淋巴结转移分组CTTN的表达淋巴结转移阳性134例(37%,134/361)：阴性10%(14/134)、弱阳性36%(48/134)、阳性29%(39/134)、强阳性25%(33/134)；淋巴结转移阴性227例(63%,227/361)：阴性8%(18/227)、弱阳性31%(70/227)、阳性32%(74/227)、强阳性29%(65/227)。CTTN表达与淋巴结转移阴、阳性无相关性(P>0.05,P=0.202)。3.7CTTN在浸润深度的肿瘤组织的表达侵及黏膜下层45例(12%,45/361)：阴性4%(2/45)、弱阳性20%(9/45)、阳性27%(12/45)、强阳性49%(22/45)；侵及肌层71例(20%,71/361)：阴性6%(4/71)、弱阳性32%(23/71)、阳性35%(25/71)、强阳性27%(19/71)；侵及纤维膜245例(68%,245/361)：阴性11%(26/245)、弱阳性35%(86/245)、阳性31%(76/245)、强阳性23%(57/245)。CTTN表达与肿瘤浸润程度明显负相关(P<0.05,P=0.000)。3.8不同分化程度肿瘤组织CTTN蛋白的表达高分化36例(10%,36/361)：阴性0%(0/36)、弱阳性31%(11/36)、阳性31%(11/36)、强阳性38%(14/36)；中分化232例(65%,232/361)：阴性8%(18/232)、弱阳性34%(79/232)、阳性31%(72/232)、强阳性27%(63/232)；低分化93例(25%,93/361)：阴性15%(14/93)、弱阳性30%(28/93)、阳性32%(30/93)、强阳性27%(21/93)。CTTN表达与肿瘤分化程度无相关性(P>0.05,P=0.069)。3.9远处转移分组CTTN的表达远处转移阳性8例(2%,8/361)：阴性0%(0/8)、弱阳性13%(1/8)、阳性37%(3/8)、强阳性50%(4/8)；远处转移阴性353例(98%,353/361)：阴性9%(32/353)、弱阳性33%(117/353)、阳性31%(110/353)、强阳性27%(94/353)。CTTN表达与远处转移阴、阳性无相关性(P>0.05,P=0.091)。3.10CTTN早、中、晚期肿瘤组织的表达早期组36例(10%,36/361)：阴性6%(2/36)、弱阳性22%(8/36)、阳性22%(8/36)、强阳性50%(18/36)；中期组214例(59%,214/361)：阴性8%(17/214)、弱阳性34%(72/214)、阳性33%(71/214)、强阳性25%(54/214)；晚期组111例(31%,111/361)：阴性12%(13/111)、弱阳性34%(38/111)、阳性31%(34/111)、强阳性23%(26/111)。CTTN表达与肿瘤早期、中期、晚期分期明显负相关(P<0.05,P=0.028)。3.11CTTN蛋白表达与患者生存期关系361例食管癌组织中CTTN蛋白表达阴性32(9%)、弱阳性118(33%)、阳性113(31%)、强阳性98(27%),经过Kaplan-Meier生存分析CTTN的表达强度与生存期无相关性(P>0.05,P=0.857)。4结论CTTN蛋白过表达与食管癌浸润程度和临床分期成负相关,提示CTTN可能是食管癌预后好的重要候选分子指标之一。