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目的：探讨天然T调节性细胞(nTreg)的组蛋白H3赖氨酸4三甲基化(H3K4me3)对foxp3基因的影响，寻找一种维持调节性T细胞(Treg)表型长期稳定的方法。
方法：使用免疫磁珠细胞(Magnetic Cell Sorting)分选法从健康人外周血中分离出CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞。对CD4+CD25+T细胞分别进行0天、3天、7天培养，其中0天为阴性对照组，3天为阳性组1，7天为阳性组2，用流式细胞仪(Flow Cytometry)对0天、3天、7天nTreg膜表型CD25的变化进行检测，并且分别对培养0天、7天的nTreg细胞用染色质免疫共沉淀(ChIP-PCR)法检测与foxp3(叉头状/翼螺旋转录因子)基因启动子区的结合H3K4me3及DNA含量的变化。
结果：在本实验条件下，(1)使用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法，确定PHA浓度在10μg/ml时为最佳的药物浓度，对Treg细胞的增殖作用最为显著。nTreg细胞培养0天、3天、7天的表型CD25变化呈递减趋势，FCM测定结果分别为（95.10±0.88）％、（49.20+1.88）％、（23.9+2.88）％。(2)用ChIP-PCR法，分别检测培养0天、7天的nTreg细胞foxp3基因启动子区H3K4me3及DNA的含量。凝胶电泳图显示，0天在204bp处可见明显条带(灰度值为2.36)，而7天（灰度值为0.34）与0天相比条带较模糊，两者差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论：本实验条件下，使用PHA培养nTreg细胞，随着培养时间延长（0天-7天），结合在foxp3基因启动子区的H3K4me3表达及DNA在减少，nTreg细胞的CD25膜表面标志丢失。PHA是不能维持Treg细胞的表型稳定，其机制与H3K4me3的减少有关。