生物转化对羟基苯乙腈(PHN)制备对羟基苯乙酰胺(PHAD)的研究

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对羟基苯乙酰胺是合成阿替诺尔的重要中间体。阿替诺尔是一种新型的β-肾上腺素能受体阻滞剂,对心脏的β受体有选择的阻滞作用,临床上具有显著的长效降压和减慢心率的效果。本文采用微生物催化技术,对生物转化对羟基苯乙腈制备对羟基苯乙酰胺的微生物菌种筛选、培养和水合酶产酶条件、静息细胞生物转化工艺进行了研究,为羟基苯乙酰胺的生物技术生产提供了一定的基础。本文筛选得到了7株有对羟基苯乙腈水解酶活力的菌株,对菌株E10a的形态、生理生化特性进行了鉴定,结合16s rDNA全序列测定,确认该菌株为赤红球菌,命明Rhodococcus ruber E10a,Genebank accession no.DQ468352。对菌株Rhodococcus tuber E10a的培养和产酶条件进行了考察,研究发现Rhodococcus ruber E10a菌株在发酵培养中加入各种诱导剂,其培养得到的菌体酶活并没有显著的提高;以酵母膏和麦芽糖分别作为氮源和碳源,有利于菌株的生长,其菌株的酶活力高;Co2+、Zn2+对该腈水合酶有明显的激活作用,而Cu2+存在下酶活力降低,同时通过试验证明该酶为Co型腈水合酶。本论文在较优的发酵条件下,制备收集E10a(Rhodococcus rubber)菌体,对其催化转化工艺条件进行了研究,结果表明,E10a静息细胞水合PHN最适pH范围6.0~7.0,最佳缓冲体系为NaH2PO4-Na2HPO4缓冲体系;底物浓度高于1.0%(w/v)时,对该酶起到抑制作用,当底物浓度达到2.0%时,E10a静息细胞的活性基本都被抑制;最适反应温度范围为30~45℃;以PHN为底物的酶动力学参数Km和νmax分别为0.29mol/L和183.824μmol/min/g;E10a静息细胞可催化转化PHN、苯乙腈和(2,2)-二甲基环丙腈为对应的酰胺。
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