猪传染性胃肠炎(swine transmissible gastroenteritis, TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(swine transmissible gastroenteritisvirus, TGEV)引发的猪的一种高度传染性猪疾病。该病毒感染可导致仔猪严重腹泻、厌食、呕吐、脱水、无力，两周龄以下仔猪死亡率最高，是危害养猪业的重要病毒之一。为了探讨连翘苷等中药成分在猪感染 TGEV后，能够发挥出怎样的作用与机制，明确中药成分在体外作用并成功达到抗病毒的疗效，本研究利用猪睾丸上皮细胞（ ST细胞）为感染模型，采用MTT比色法和细胞病变观察法相结合，筛选出抗TGEV活性较好的中药成分，将抗TGEV中药成分不同作用方式下在ST细胞上与病毒结合，根据细胞形态及病毒量的变化，明确中药成分抑制 TGEV增殖等一系列作用过程及初步原理。同时对筛选出的中药成分进行复方组合，观察复方中药成分对 TGEV的作用疗效，为抗TGEV的药物筛选提供依据。主要研究内容包括：　　1.药物活性筛选细胞模型的建立　　对长满单层的ST细胞感染TGEV强毒株病毒，当细胞出现明显的病理变化时，通过 RNA提取试剂盒提取病毒的总 RNA，用 cDNA第一链合成试剂盒生成新的cDNA。以所获得的cDNA作为PCR模版进行DNA的复制与合成，经琼脂糖凝胶电泳，扩增出了条带大小约0.75 kb的特异性片段，在最初设想的条带大小范围之内。并进行 TGEV测序及同源性分析。把 TGEV培养液连续十倍倍比稀释，依次接种到布满单层ST细胞的96孔板上，设置对照组，培养72 h，并对细胞病变情况进行每天记录。随后根据 Karber法计算病毒半数组织细胞感染量为10-6.25/0.1 mL，用细胞维持液配成100?TCID50病毒悬液，-70℃冻存备用。这些步骤为筛选抗病毒中药成分的细胞培养模型创造了条件。　　2.抑制TGEV增殖中药成分的体外筛选　　将各中药成分在最大安全的浓度范围内连续2倍倍比稀释后，依次采用先感染病毒再用药、先用药后进行病毒感染、药和病毒混合后感染 ST细胞三种方法来体外增殖抑制试验，通过酶标仪测得630 nm处OD值，计算出不同作用方式下中药成分分别对 TGEV的抑制率，筛选出抗 TGEV活性较好的中药成分，并分别记录抗病毒效果最佳时药物的浓度，6种中药成分与病毒作用后，分别测定TGEV的病毒滴度并进行分析比较、RT-PCR鉴定各个药物成分对病毒 RNA合成的抑制效果。结果表明：6种中药成分在 ST细胞上对 TGEV均有达到有效的增殖抑制效果，其中，咖啡酸直接杀灭病毒效果最显著。了解中药成分抗病毒的作用方法为进一步认识中药抗病毒的治疗原理做了铺垫。　　3.复方中药成分对TGEV的增殖抑制作用　　对2中筛选的最佳抗 TGEV浓度的中药成分进行复方组合，第一组：连翘苷和连翘苷元；第二组：连翘苷和咖啡酸；第三组：连翘苷元和咖啡酸；第四组：连翘苷、连翘苷元和咖啡酸。将抗 TGEV最佳浓度的中药成分复方组合后与病毒混合后感染细胞，设置正常细胞对照组，病毒对照组，每组设置3个重复，通过酶标仪测得630 nm处OD值，计算出各组复方中药成分分别对TGEV的抑制率，各组中药成分与病毒作用后，测定 TGEV的病毒滴度并进行比较分析。结果表明：复方中药成分抑制 TGEV增殖效果为：连翘苷、连翘苷元和咖啡酸组>连翘苷和咖啡酸组>连翘苷元和咖啡酸组>连翘苷和连翘苷元组。本研究为抑制 TGEV的药物筛选方法提供了理论基础，为中成药物的研制开发了新的思路。