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目的:探讨泛素连接酶RING2在苯并(a)芘染毒人支气管上皮细胞16HBE和BEAS-2B后致DNA氧化损伤中的作用和对P53-P21信号通路的影响,初步揭示组蛋白泛素化与DNA损伤修复之间存在的内在关系。方法:以16HBE和BEAS-2B未处理细胞组为阴性对照组,二甲基亚砜(DMSO)组为溶剂对照组,MOCK si RNA组为序列对照组。在使用RNA干扰技术降低16HBE和BEAS-2B细胞泛素连接酶RING2基因表达前后,分别采用不同浓度Ba P(1、2、4、8、16、32μmol/L)染毒24 h;16μmol/L Ba P染毒不同时间(1、2、4、8、12、24 h)。用ELISA法检测各组细胞8-羟基-脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanine,8-OH-d G)的含量,用Western-blot法检测各组细胞P53、P21、p-P53ser15、p-P53ser20、p-P53ser37蛋白表达水平。结果:Ⅰ.ELISA法检测结果显示:1.与阴性对照组相比,16HBE和16HBE(si RNA-RING2)细胞染毒后各浓度组8-OH-d G的含量均随着染毒浓度的增加而增加(P<0.05),协方差分析显示16HBE(si RNA-RING2)细胞组的修正均数(13.312)比16HBE细胞组(7.969)明显增加(P<0.05);16HBE和16HBE(si RNA-RING2)细胞染毒后各时点组8-OH-d G的含量均随着染毒时点的增加而增加(P<0.05),协方差分析显示16HBE(si RNA-RING2)细胞组的修正均数(7.803)比16HBE细胞组(4.235)明显增加(P<0.05)。2.BEAS-2B和BEAS-2B(si RNA-RING2)细胞染毒后各浓度组8-OH-d G的含量均随着染毒浓度的增加而增加(P<0.05),协方差分析显示BEAS-2B(si RNA-RING2)细胞组的修正均数(11.237)比BEAS-2B细胞组(5.766)明显增加(P<0.05);BEAS-2B和BEAS-2B(si RNA-RING2)细胞染毒后各时点组8-OH-d G的含量均随着染毒时点的增加而增加(P<0.05),协方差分析显示BEAS-2B(si RNA-RING2)细胞组的修正均数(7.615)比BEAS-2B细胞组(3.524)明显增加(P<0.05)。Ⅱ.Western-blot法检测结果显示:1.与阴性对照组相比,用不同浓度Ba P染毒和16μmol/L Ba P染毒不同时间后,16HBE和BEAS-2B细胞组P53,P21,p-P53ser15,p-P53ser20,p-P53ser37蛋白的表达量均增加(P<0.05)。2.干扰前后两组细胞各蛋白表达情况的比较结果显示:16HBE细胞组P53、P21、p-P53ser15、p-P53ser20、p-P53ser37的表达量比16HBE(si RNA-RING2)细胞组均增加(P<0.05),分别是16HBE(si RNA-RING2)细胞组的1.811倍、3.287倍、4.172倍、3.018和2.118倍。BEAS-2B细胞组P53、P21、p-P53ser15、p-P53ser20、p-P53ser37表达量比BEAS-2B(si RNA-RING2)细胞组均增加(P<0.05),分别是BEAS-2B(si RNA-RING2)细胞组的1.978倍、2.564倍、7.012倍、2.774和1.875倍。结论:1、Ba P染毒后的人支气管上皮细胞8-OH-d G的含量增加,Ba P染毒与8-OH-d G的含量之间存在明显的时间效应和剂量效应关系。与野生型细胞相比,RING2低表达的细胞8-OH-d G的含量增加,DNA氧化损伤程度加重,RING2可能参与了DNA氧化损伤修复过程。2、Ba P染毒后的人支气管上皮细胞P53-P21信号通路中相关蛋白质的表达量增加。与野生型细胞相比,RING2低表达的细胞P53-P21信号通路中相关蛋白质的表达量降低,其中p-P53ser15的变化尤为明显。3、Ba P染毒RING2低表达的细胞后DNA氧化损伤程度加重可能与P53-P21信号通路中相关蛋白质的表达降低有关。