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第一部分海马神经纤维髓鞘损伤在慢性束缚应激抑郁症中的作用目的:在抑郁症的发生发展过程中,海马神经纤维髓鞘会发生怎样的变化,目前并不明确,本实验旨在研究海马神经纤维脱髓鞘损伤在慢性应激抑郁症中的作用。方法:采用慢性束缚应激(chronic restraint stress,CRS)建立小鼠抑郁症模型,将成年健康雄性Kunming小鼠束缚于长约10 cm,直径3.3 cm,通风良好的塑料管中,每天束缚持续6 h(10:00-16:00),持续21天;束缚期间不给予水和食物。每两天称量1次体重。造模结束后,采用糖水偏爱实验、悬尾实验及强迫游泳实验评价各组动物的抑郁样行为。采用Western Blot和免疫荧光实验观察抑郁症小鼠海马不同脑区(CA1、CA3和DG区)髓鞘标记蛋白MBP表达的变化。并于双侧海马CA3区注射1%溶血卵磷脂(lysophosphatidylcholine,LPC)1μl诱导局部脱髓鞘反应,观察CA3区神经纤维脱髓鞘小鼠以上行为学变化。结果:(1)与正常动物相比,模型组小鼠糖水偏好百分率明显下降;强迫游泳和悬尾实验中累计不动时间均明显增加,以上结果表明慢性束缚应激可使小鼠出现抑郁样行为改变;(2)慢性束缚应激抑郁症小鼠整个海马组织中髓鞘碱性蛋白MBP表达显著下降,但是成熟少突胶质细胞和少突胶质前体细胞标记物蛋白CNPase和PDGFα的表达没有明显变化;(3)慢性应激抑郁症小鼠海马CA3区组织MBP蛋白表达显著降低,而海马CA1和DG区组织MBP的表达没有明显变化。(4)双侧海马CA3区注射给予LPC导致神经纤维脱髓鞘,与溶剂组小鼠相比,注射LPC小鼠海马组织中MBP蛋白表达明显降低;糖水饮用率明显下降;强迫游泳和悬尾实验中的不动时间明显增加,以上结果表明海马CA3区神经纤维髓鞘损伤可引起抑郁样行为。结论:海马CA3区神经纤维脱髓鞘改变可能参与了抑郁症的发病过程。第二部分Retigabine改善慢性束缚应激抑郁样行为和认知功能障碍的作用及机制目的:研究KCNQ/Kv7通道激活剂Retigabine改善慢性束缚应激小鼠的抑郁样行为和认知功能障碍的作用及机制。方法:采用慢性束缚应激制备小鼠抑郁症模型,造模期间,每天在束缚前30 min,腹腔注射给予瑞替加滨(10 mg/kg)或生理盐水,每两天记录一次体重。21天应激模型结束后,通过糖水偏好实验、悬尾实验及强迫游泳实验,观察Retigabine对慢性束缚应激小鼠抑郁样行为的影响;采用Morris水迷宫和新事物认知实验实观察retigabine对慢性束缚应激小鼠的学习记忆功能的影响,采用Western Blot和免疫荧光实验观察retigabine对慢性束缚应激小鼠海马少突胶质前体细胞、成熟少突胶质细胞数量和髓鞘蛋白表达的影响。采用脑立体定位注射给予1%LPC 1μl诱导海马CA3区神经纤维脱髓鞘损伤,并从LPC注射第一天开始,连续7天每天上午9:00-10:00腹腔注射给予retigabine(10 mg/kg)或溶剂(N.S)。采用糖水偏爱实验、悬尾实验及强迫游泳实验评价各组小鼠抑郁样行为;采用Western blot和免疫荧光实验检测海马神经髓鞘碱性蛋白MBP表达和成熟少突胶质细胞数量的变化。并采用Western Blot检测信号通路分子p-Akt,p-GSK-3b等蛋白的表达。结果:(1)Retigabine不影响慢性应激小鼠的体重增长率:慢性应激小鼠的体重增长率显著降低,retigabine不能抑制慢性束缚应激所致的体重增长率的降低。(2)Retigabine能显著改善慢性束缚应激小鼠的抑郁样行为:retigabine增加慢性应激小鼠糖水摄入百分率,缩短在强迫游泳和悬尾实验中的不动时间。(3)Retigabine能改善慢性束缚应激小鼠的记忆障碍:retigabine明显增加慢性束缚应激小鼠在目标象限停留时间和穿越原平台所在位置的次数,retigabine可缩短慢性束缚应激小鼠第4天的逃逸潜伏期,但是同模型组小鼠相比,没有显著性差异。并且retigabine显著提高慢性应激小鼠对新事物的认知指数。(4)Retigabine改善慢性束缚应激小鼠海马CA3区神经纤维的脱髓鞘的损伤:retigabine增加慢性应激抑郁小鼠整个海马组织髓鞘蛋白MBP的表达,并且retigabine可增加慢性应激小鼠海马CA3组织中髓鞘蛋白的表达和海马成熟少突胶质细胞数量,但是不影响少突胶质前体细胞数量。(5)Retigabine明显改善海马CA3神经纤维脱髓鞘损伤导致的抑郁样行为:同海马CA3神经纤维脱髓鞘小鼠比,retigabine明显增加脱髓鞘小鼠蔗糖水摄入百分率,减少强迫游泳和悬尾实验中的累计不动时间,并可以增加海马组织中MBP蛋白的表达。(6)瑞替加滨上调应激抑郁症小鼠海马组织中磷酸化Akt和磷酸化GSK-3β表达:免疫蛋白印迹结果表明应激抑郁症小鼠海马组织中的pGSK-3β和p-Akt表达下调,retigabine可明显增加抑郁症小鼠海马组织中p-GSK-3β,p-Akt的表达。结论:Retigabine保护海马神经纤维脱髓鞘损伤改善慢性束缚应激所致的抑郁样行为和记忆功能障碍,其作用可能与激活Akt/GSK-3β信号通路有关。