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[目的]
本研究是通过慢性低氧肺动脉高压大鼠模型,研究慢性低氧对大鼠肺动脉血管壁腺苷A2B受体(A2BR)的分布、含量和基因表达的影响,以期为临床应用腺苷或受体激动剂治疗肺动脉高压提供理论依据。
[方法]
1.建立常压低氧性肺动脉高压大鼠模型。
2.实验分组:48只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分成对照组(常氧组)、低氧1天组、低氧3天组、低氧5天组、低氧7天组、低氧10天组、低氧14组、低氧21天组,每组6只。
3.用右心导管法测定平均肺动脉压(mPAP)。
4.用免疫组织化学方法观察腺苷A2BR蛋白表达的分布和含量的变化。
5.用荧光原位杂交法检测肺动脉壁上腺苷A2B受体mRNA(A2BRmRNA)的分布和表达水平。
6.用实时荧光定量PCR方法检测肺动脉血管壁腺苷A2BR基因表达水平。
[结果]
1.肺动脉平均压在低氧第五天既明显增高,较对照组比较有统计学意义(P<0.05)。
2.免疫组化结果显示,慢性低氧导致腺苷A2BR蛋白在大鼠肺动脉血管壁平滑肌细胞膜和血管内膜中表达增加,随着低氧时间延长,逐渐增加,低氧5天组以上(含5天组)相对于对照组均有统计学意义(P<0.001),而在常氧组及3天以下组极少表达。
3.荧光原位杂交试验结果显示,腺苷A2BRmRNA表达在正常大鼠肺动脉血管壁平滑肌细胞膜和血管内膜中较少表达,低氧导致表达增高,从低氧第3天起开始增加,至低氧第5天时相对于对照组有统计学意义(P<0.001),随着低氧时间延长,逐渐增加,较对照组比较均有统计学意义(均P<0.001)。
4.实时荧光定量PCR检测结果显示:细胞中腺苷A2BR基因表达从低氧第3天开始增加,在低氧第5天后明显增高(均P<0.001),并随着低氧时间的延长,表达逐渐升高。
[结论]
1.腺苷A2BRmRNA和蛋白在正常大鼠肺动脉壁较少表达。
2.慢性低氧致大鼠肺动脉壁平滑肌细胞和内皮细胞A2BR mRNA表达和蛋白表达增加,并随低氧时问延长而增加。