论文部分内容阅读
目的:本实验通过对不同级别人脑胶质瘤组织及正常脑组织中的酪蛋白激酶CK2及人造血相关的PBX相互作用蛋白HPIIP表达含量的测定,探讨人脑胶质瘤中酪蛋白激酶CK2和人造血相关的PBX相互作用蛋白HPIP在脑胶质瘤中的表达意义及两者的相关性。方法:收集自2014年4月到2015年9月河北医科大学第二医院神经外科人脑胶质瘤组织标本64例,已取得病例标本病理诊断明确,由河北医科大学第二医院病理科有经验或高年资主任医师按照WHO脑肿瘤分级诊断标准完成,其中I级人脑胶质瘤9例,II级人脑胶质瘤17例,III级人脑胶质瘤18例,IV级人脑胶质瘤11例。正常脑组织的病理标本均来自因颅脑外伤或颅内出血病患需要行内减压术所取的脑组织标本,共取13例作为对照组。本次实验研究所收集的人脑胶质瘤病理诊断,均为首诊,在手术前均未采取任何放疗及化疗等抗肿瘤治疗措施。所有实验用的标本,均是手术中切除病理组织标本后,快速取材,分别以10%的福尔马林液和-80度液氮保存待用。所取标本分为以下五组:正常脑组织组,I级胶质瘤组,II级胶质瘤组,III级胶质瘤组,IV级胶质瘤组。其中低级别胶质瘤I~II级,高级别胶质瘤III~IV级。采用免疫组织化学方法IHC分别检测CK2和HPIP在上述病理组织切片中的表达,采用统计软件SPSS19.0分析,免疫荧光法检测CK2和HPIP在同一病理切片内表达情况,分析其表达特点。应用Western Blot方法同测定上述每组标本CK2和HPIP的蛋白印迹情况,应用相关软件Quantity One分别检测各条带的灰度值,根据灰度值在应用SPSS 19.0软件中进行统计分析后得出结论。结果:1免疫组织化学IHC检测结果统计描述,统计数据符合正态性检验以(x±s%)表示,得知:HPIP在正常脑组织,低级别人脑胶质瘤I~II级,阳性率分别为6.98±4.604%、25.54±20.093%、53.32±23.630%。而在高级别人脑胶质瘤III~IV级,表达阳性率分别达到73.69±15.539%、82.79±16.246%,可见随着肿瘤恶性程度不断增高,HPIP表达量不断增加,单因素方差分析(One-way ANOVA)结果统计量为14.736,P<0.01,Pearson等级相关分析得出的相关系数r=0.779,P<0.01,HPIP表达与肿瘤分级有关。肿瘤恶性程度分级越高,HPIP表达阳性率随之越高,图片见:Fig 1~5。统计图表详见Table 1、Table 2。CK2正常脑组织,低级别人脑胶质瘤I~II级,阳性率分别为8.97±8.379%、28.70±19.848%、45.75±24.881%。高级别人脑胶质瘤III~IV级表达阳性率分别为66.50±18.170%、76.67±16.887%,可得出随着肿瘤恶性程度增高,CK2表达量增加。单因素方差分析(One-way ANOVA)结果统计量为9.680 P<0.01,Pearson等级相关分析得出相关系数r=0.712,P<0.01,CK2表达可与肿瘤分级呈正相关:CK2随着肿瘤分级升高,而表达阳性率越高。图片见Fig.6~10、Table 3、Table 4。针对HPIP与CK2的表达情况进行了相关性分析。Pearson等级相关分析得出的相关系数为r=0.922,P<0.01,即HPIP表达与CK2表达呈高度相关:随着HPIP表达阳性率等级越高,CK2表达阳性率等级亦越高,详见Table 5。2免疫荧光结果分析得知;观察两种因子在同一病理组织标本中的分布情况。可见绿色荧光是CK2因子,而红色荧光是HPIP因子,细胞核显示为蓝色荧光。同一病理组织切片中两种蛋白,分布表达共同定位在细胞核。详见Fig11、Fig12、Fig13。3 Western blot结果显示:采用此方法对各组织标本的蛋白含量进行测定。观察CK2、HPIP两种蛋白,分别在正常脑组织对照组,低级别人脑胶质瘤I~II级、高级别人脑胶质瘤III~IV级的蛋白表达情况,检测结果以测定的灰度值为标准。计算方法为目的条带与GAPDH光密度的比值作为蛋白的相对表达量,实验重复10遍,分析HPIP、CK2的相对表达量,HPIP的相对表达量逐渐升高,CK2的相对表达量逐渐增高。各级别人脑胶质瘤组分别与正常脑组织组内比较,采用单因素方差分析(One-way ANOVA)。结果以均数±标准差SD表示,P<0.05,均有统计学意义。Pearson等级相关分析得出的相关系数为r=0.926,P<0.01,即随着HPIP相对表达量升高,而CK2相对表达量升高。详见Table 6、Table 7、Fig.14、Fig.15、Fig.16、Fig.17、Fig.18、Fig.19。结论:1 CK2与HPIP在正常脑组织均呈阳性表达,在不同级别人脑胶质瘤都呈过表达。正常脑组织,低级别人脑胶质瘤I~II级,高级别人脑胶质瘤III~IV级三组之间以及两两组间的表达比较,均存在显著性统计学意义。随着人脑胶质瘤的恶性级别增高,CK2与HPIP表达量逐渐增高。表明在人脑胶质瘤的发展过程中,CK2与HPIP可能具有重要的作用,与人脑胶质瘤的恶性程度可能具有一定关系。2观察同一病理组织标本中两种因子的分布情况。相同组织切片中两种因子,分布表达均定位在细胞核。结合统计分析的结果,CK2与HPIP可能存在一定的相关性,提示两者之间可能存在相互作用。3通过对正常脑组织、低级别和高级别人脑胶质瘤组内检测结果,两种实验的等级相关性分析,P值均小于0.01。由此推断,HPIP有可能通过辅助CK2在人脑胶质瘤中发挥协同作用。