论文部分内容阅读
整合素是一类非常重要的细胞表面粘附分子，是由和两个亚基组成的异源二聚体跨膜蛋白。作为细胞内外的桥梁，整合素一方面负责介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质以及细胞与病原体的相互作用，另一方面可以双向传递跨膜信号，这对于免疫反应、免疫细胞的组织定位、凝血、组织愈伤、癌细胞转移以及组织和器官的发育等都至关重要。整合素47是炎症反应病理过程中淋巴细胞的迁移运动的重要粘附分子，是一类重要的淋巴细胞归巢受体，主要表达在B淋巴细胞和T淋巴细胞的表面，通过与其配体MAdCAM-1(mucosal addressin cell adhesion molecule-1)分子的相互作用，从而调控淋巴细胞在血管内皮细胞表面的滚动和粘附。整合素表达或构象的异常与炎症反应相关，比如炎症性肠病（Inflammatory boweldisease，IBD），IBD是一种结肠和小肠的炎症，主要包括克罗恩病（Crohn’s disease）和溃疡性结肠炎（ulcerative colitis），在IBD发生发展过程中往往伴随有整合素47表达的升高和异常活化，活化后的整合素47通过与其配体MAdCAM-1相互作用之后向下游的信号传递会加重炎症的发展。因此，以整合素α4β7和其配体作为制药靶点来治疗炎症性肠病成为了热点，把能识别整合素α4β7的抗体作为药物候选，用以治疗相关疾病。所以，找到能特异抑制活化构象的整合素47对于IBD等炎症的治疗会起到好的疗效，而找到能够高亲和性识别整合素47的抗体是找到各种功能型抗体的前提，整合素47的高亲和性抗体种类的充实也会给研究带来方便。LJF9的scFv抗体片段是从人源噬菌体scFv抗体库(Tomlinson I+J)筛选出来的，能识别整合素α4β7，且亲和性较高。我们又将LJF9的重链和轻链可变区分别插入带有人源IgG1重链恒定区和轻链恒定区的载体中构建成全长重链和轻链，共转入真核表达系统表达，proteinA柱纯化得到了全长单克隆抗体蛋白，最后用流式细胞术检测构建的LJF9全长IgG抗体对整合素α4β7有较高的的亲和性。