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目的:目前，在世界范围内癌症总发病率呈逐渐上升趋势，我国每年因癌症去世的人数约150万。传统应用手术、放疗、化疗等手段能够达到一定的临床治愈，但是仍存在一定的局限性。近年来，生物治疗由于其治疗的全身性、个体化等得到了临床的认可，生物治疗包括：细胞因子治疗、免疫活性细胞治疗、诱导分化治疗、基因治疗等。目前，包括干扰素-α在内的细胞因子治疗肿瘤已经应用于临床，并且取得了良好的疗效。近几年，人们发现了干扰素家族的新成员-干扰素λ，它的受体复合体由特异性的IL-28Rα、IL-10Rβ链组成。干扰素λ与干扰素α具有相似的抗病毒、抗肿瘤细胞生长及免疫调节等作用，但与干扰素α相比，干扰素λ无明显的骨髓抑制作用及毒副作用且其作用长效，目前干扰素λ在各项体外研究中初步显示了抗肿瘤作用。本实验旨在通过检测干扰素λ受体在乳腺癌细胞系,食管癌细胞系及恶性间皮瘤细胞系中表达，并确定其对于上述细胞系是否存在明显的增殖抑制作用，进而初步探索干扰素λ的抗癌机理及其联合化疗药物时是否对肿瘤细胞系存在协同抑制作用。此研究结果将为干扰素λ成为一种有效抗击癌症的新兴生物治疗手段提供理论依据。方法：首先采用PCR技术检测乳腺癌231、453、MCF-7细胞，食管癌TE1、TE2、TE10、YES6、T.Tn细胞，恶性间皮瘤H2452、H2052、H226、211H、H28细胞，正常的食管上皮Het-1A细胞等14种细胞是否表达IFN-λ受体复合体；同时应用MTT技术检测经IFN-λ处理后细胞的增殖情况；选取表达IFN-λ受体且IFN-λ对细胞增殖有明显抑制作用的细胞株，应用MTT技术检测IFN-λ联合应用化疗药物时，两者是否存在协同作用；应用westernblotting技术，检测细胞系中caspase3、PARP、caspase8等，初步探索IFN-λ的抗肿瘤增殖机制。结果：1乳腺癌、食管癌、正常的食管上皮细胞及恶性间皮瘤细胞中干扰素-λ受体复合体的表达情况乳腺癌细胞、食管癌细胞、正常的食管上皮细胞及恶性间皮瘤细胞的RT-PCR产物在1％的琼脂糖凝胶上电泳后，结果显示：食管癌TE1、TE2、TE10、YES6、T.Tn细胞，正常的食管上皮Het-1A细胞、乳腺癌453细胞、恶性间皮瘤H2052细胞出现了与预期相符的片段，说明其表达IL-28Rα、IL-10Rβ基因，即表达IFN-λ受体复合体；而乳腺癌231、MCF-7细胞,恶性间皮瘤H2452、H226、211H、H28细胞未出现与预期相符的片段，说明其不表达IFN-λ受体复合体。提示：IFN-λ受体复合体在不同细胞系中的表达具有特异性。2IFN-λ对乳腺癌细胞、食管癌细胞、正常的食管上皮细胞及恶性间皮瘤细胞的增殖影响将以上14种细胞株分别分为5组进行培养，分别是无处理组，IFN-λ（1ng/ml）处理组，IFN-λ（10ng/ml）处理组，IFN-λ（100ng/ml）处理组，IFN-λ（1000ng/ml）处理组。培养96h后应用MTT法检测细胞增殖情况。结果显示，不同浓度的干扰素-λ对乳腺癌231、453、MCF-7细胞、恶性间皮瘤H2452、H2052、H226、211H、H28细胞、食管癌TE1、TE2、TE10、YES6细胞、正常的食管上皮Het-1A细胞不具有增殖抑制活性,经统计学分析，差别无统计学意义（P>0.05);不同浓度的干扰素-λ对食管癌T.Tn细胞具有明显的增殖抑制活性，经统计学分析，差别有统计学意义（P<0.05);并且其增殖抑制活性在一定范围内随着干扰素-λ浓度的升高而增强。提示：干扰素-λ的抗肿瘤增殖活性在不同细胞中表现不同。3IFN-λ与化疗药物联合应用时对细胞增殖的影响选取IFN-λ受体阳性且IFN-λ对其增殖抑制作用明显的食管癌T.Tn细胞株3.1以无处理组的细胞增殖活性为100%，单纯应用IFN-λ（10ng/ml）组细胞增殖活性为93%，单纯应用5-FU（10uM）组细胞增殖活性为63.5%，同时应用IFN-λ（10ng/ml）和化疗药物5-FU（10uM）组细胞增殖活性为35.8%；经统计学分析，各组间差别有统计学意义（P<0.05)。3.2以无处理组的细胞增殖活性为100%，单纯应用IFN-λ（10ng/ml）组的细胞增殖活性为96.3%，单纯应用CDDP（10uM）组的细胞增殖活性为66.2%，同时应用IFN-λ（10ng/ml）和CDDP（10uM）组的细胞增殖活性为45.5%；经统计学分析，各组间差别有统计学意义（P<0.05)。提示：IFN-λ可明显增强化疗药物5-FU或CDDP对细胞的增殖抑制活性，两者同时应用时可产生协同作用。4IFN-λ诱导食管癌T.Tn细胞凋亡酶的检测4.1IFN-λ可诱导剪切形式的caspase3蛋白增加正常细胞内，caspase3蛋白以非活性状态存在，启动激活时可将部分肽链进行剪切，转变成剪切形式的具有激酶活性的caspase3蛋白，它是细胞凋亡程序的重要启动者和执行者。Western蛋白印迹结果显示：IFN-λ可显著上调食管癌T.Tn细胞中剪切形式的caspase3蛋白表达。提示：IFN-λ通过激活caspase3诱导细胞凋亡。4.2IFN-λ可诱导剪切形式的PARP蛋白增加PARP(polyADP-ribosepolymerase)是细胞凋亡核心成员胱天蛋白酶(caspase)的切割底物。Western蛋白印迹结果显示：IFN-λ可显著上调食管癌T.Tn细胞中剪切形式的PARP蛋白表达。提示：IFN-λ通过激活PARP诱导细胞凋亡。4.3IFN-λ可诱导活化形式的caspase8蛋白增加在正常细胞内caspase8通常以酶原的形式存在，在细胞凋亡的信号转导过程中被激活。Western蛋白印迹结果显示：IFN-λ可显著上调食管癌T.Tn细胞中剪切形式的caspase8蛋白表达。提示：IFN-λ通过激活caspase8诱导细胞凋亡。结论：1IFN-λ受体复合体在不同种细胞系中的表达具有特异性。2干扰素-λ的抗肿瘤增殖活性在不同细胞中表现不同；IFN-λ与化疗药物（5-FU或CDDP）联合应用可显著增强化疗药物对食管癌细胞的生长增殖抑制作用，两者具有协同作用。3IFN-λ可显著上调剪切形式的caspase3、Caspase8、PARP蛋白表达，提示：IFN-λ可诱导细胞凋亡。