砧用野生茄(Solanums torvum)试管微扦插繁殖与多倍体新种质创制研究

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嫁接栽培是茄果类蔬菜防治土传病害和提高产量的重要措施。茄子野生近缘种托鲁巴姆(Solanums torvum)因综合抗性强,成为了茄子和番茄的常用优良砧木。但是,由于托鲁巴姆的种子发芽率、发芽势和发芽指数低,成苗苗龄长,限制了其在嫁接育苗上的大规模应用,因此迫切需要研发新方法提高托鲁巴姆的育苗效率,降低育苗成本。植物染色体加倍后,多倍体往往具有植株粗壮、抗逆性更强等优点,因此培育四倍体托鲁巴姆对砧用茄子的遗传改良具有重要意义。本研究针对托鲁巴姆播种育苗效率低,倍性育种基本空白的现状,一方面建立利用试管内微扦插快繁技术体系,为高效繁育砧用茄子提供新途径;另一方面通过秋水仙素诱导,获得托鲁巴姆四倍体突变植株,为开展砧用茄子多倍体育种研究创制新种质。主要研究结果如下:1.以编号S07、J8两种托鲁巴姆的种子为材料,通过试管内无菌播种获得初代无菌苗,以初代无菌苗的茎段为外植体进行试管内微扦插试验研究。结果表明,初代芽诱导的最佳培养基是MS+KT 0.5 mg·L-1+IBA 0.1mg·L-1,腋芽诱导效果最佳,S07出芽率达到90%,J8出芽率达到96.67%;继代增殖最佳培养基是MS+IBA 0.4 mg·L-1,S07增殖系数6.11,J8增殖系数6.78,增殖植株生长势强;生根培养的最佳培养基是1/2 MS+IBA 0.2mg·L-1,生根率100%,S07生根数4.56,J8生根数6.22,根系生长强壮,须根较多。试管微扦插繁殖苗(简称微扦插苗)的炼苗移栽成活率均达到90%以上,能有效提高育苗效率,可实现工厂化快速育苗。2.采用伤根灌注法对托鲁巴姆的微扦插苗进行青枯病抗性鉴定。结果表明,S07微扦插苗的发病率6.67%、病情指数2.50,S07实生苗(CK)发病率3.33%、病情指数1.25;J8微扦插苗的发病率5.00%、病情指数1.33,J8实生苗(CK)发病率5.00%、病情指数2.08。S07和J8的微扦插苗和实生苗均表现高抗青枯病,说明利用试管微扦插技术繁育的种苗可保持高抗青枯病的特性。3.采用秋水仙素浸种法进行托鲁巴姆多倍体诱导试验研究,利用流式细胞仪对诱导植株进行倍性鉴定。结果表明,使用0.3%秋水仙素浸种48 h诱导J8多倍体的效果最好,四倍体诱导率13.33%,嵌合体诱导率11.33%;使用0.4%秋水仙素浸种48 h诱导S07多倍体的效果最好,四倍体诱导率16.67%,嵌合体诱导率15.33%。4.将流式细胞仪鉴定出的四倍体植株进行形态鉴定和气孔鉴定,发现四倍体和二倍体部分表型特征存在差异。S07和J8四倍体植株移栽生长90d,分别与二倍体播种植株相比,株高增加33.28%、32.36%,茎粗增加13.42%、17.11%,节间短缩27.26%、28.03%;叶片长度增加20.14%、14.92%,叶片宽度增加14.91%、17.98%,叶片厚度增加7.97%、10.87%,叶绿素含量增加9.49%、12.86%;保卫细胞长增加44.16%、62.10%,保卫细胞宽增加19.78%、17.27%;气孔密度增加45.54%、55.52%。四倍体巨大化特征表现为植株株高、茎粗增加,节间短缩,叶片厚而大,叶色较深,保卫细胞增大,气孔密度明显增加。
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