论文部分内容阅读
D-苏式-对甲砜基苯丝氨酸乙酯,是氟苯尼考的重要合成中间体之一。目前制备对映体纯的D-苏式-对甲砜基苯丝氨酸乙酯的途径大都为化学法途径。以酶法手性拆分获得对映体纯的D-苏式-对甲砜基苯丝氨酸乙酯在国内外几乎没有报道。本文以从土壤中筛选产脂肪酶微生物与实验室现有商品脂肪酶为基础,建立了脂肪酶平台,供不对称水解DL-苏式-对甲砜基苯丝氨酸乙酯进行酶源选择。利用改进型初筛培养基及传统复筛培养基,共从65份土壤样品中高效地筛选出了19株产脂肪酶微生物,其中酶活相对较高的菌株有9株。研究过程中发现对甲砜基苯丝氨酸乙酯能够在纯水中自发水解及在有机溶剂脂肪酶水解的过程中发生一系列副反应,通过正相、反相HPLC、LC-MS、1HNMR等分析检测方法,共检测出了10种副产物,同时也考察了一些因素,如pH、温度、底物浓度等对于副反应的影响;通过观察研究,推理出了合理的副反应机制。研究发现,对甲砜基苯甲醛在整个副反应中作为一个关键的中间副产物存在;以一定速率水解的对甲砜基苯丝氨酸乙酯能够作为副反应的驱动力,从而促进副反应的进行;在纯水中,加入一些金属离子能够有效地抑制p-MPSE自发副反应的发生。通过研究,确立了对甲砜基苯丝氨酸乙酯酶促不对称水解最适微水有机溶剂为叔丁醇,最适脂肪酶酶源为Novozyme435;通过考察各类因素对酶促不对称水解对甲砜基苯丝氨酸乙酯的影响,确定了最佳的催化拆分条件;对于能够发挥抑制副反应效用的Zn2+的考察显示,Zn2+的加入将加快底物的转化率,但同时严重影响E值。