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目的：随着现代生活习惯的改变和生活质量的提高,很多人开始胖起来,肥胖症已渐渐成为危害全球人类健康的重要疾病,与2型糖尿病、高血压、心脑血管疾病、脂代谢异常、胰岛素抵抗、非酒精性肝病、哮喘以及关节炎等等多种疾病的发生发展密切相关。脂肪细胞中脂质的过度积聚是肥胖症形成其中的中心环节,多种因素参与过程其中,但是发病机制还不完全清楚,因此关于此方面的研究,对肥胖症的防治有重要意义并逐渐成为热门的课题。1997年美国基因学家发现肌肉生长抑素(Myostatin)及其基因(MSTN),对肌肉生长具有抑制作用,目前研究者普遍认为肌肉是全身最大的耗能组织之一,肌肉生长抑素的缺乏可导致肌肉异常增生,同时可能出现肌肉耗能增加,从而调控能量的分配,对认识肥胖的发病机制可能有重大的意义。本研究拟用质粒构建技术及基因表达技术,构建该基因的表达载体,期待用于观察MSTN基因过表达对肥胖小鼠体重、内脏脂肪含量、糖脂代谢等的影响,进而进一步通过该工具观察探讨MSTN与肥胖症的关系。方法：1小鼠MSTN蛋白表达质粒pcDNA3.1(+)-mMSTN的构建：1.1mMSTN cDNA插入片段的扩增：从ICR小鼠肌肉组织中提取总RNA,经RT-PCR,获得大量拷贝的MSTN cDNA,然后插入pEASY-T1克隆载体中,经BamHI、ApaI双酶切后,获得带有酶切位点的小鼠MSTN表达序列片段。1.2载体片段的获得：以pcDNA3.1(+)质粒转化TOP10感受态细菌,得到该质粒的大量拷贝后,大量提取,经BamH I、Apa I双酶切后,进行琼脂糖电泳回收,获得用于构建mMSTN表达质粒的载体片段。1.3应用T4DNA连接酶,将带有酶切位点的mMSTN扩增片段,与pcDNA3.1(+)质粒酶切以后的载体片段进行连接,构建成pcDNA3.1(+)-mMSTN质粒。2pcDNA3.1(-)-mZAG表达质粒的体外鉴定：应用阳离子脂质体转染方法将pcDNA3.1(+)-mMSTN质粒瞬时转染到小鼠3T3-L1前脂肪细胞中,48h后收集细胞提起RNA,逆转录合成cDNA后,用real-time PCR方法观察细胞中MSTN的表达情况。结果：1.成功克隆小鼠MSTN cDNA全序列,并将其与pcDNA3.1(+)载体片段连接,构建成pcDNA3.1(+)-mMSTN表达质粒。2.在体外培养的小鼠3T3-L1前脂肪细胞系中,证实MSTN表达质粒pcDNA3.1(+)-mMSTN可以在脂肪细胞中良好表达。结论：1成功构建了pcDNA3.1(+)-mMSTN表达质粒,在体外能良好表达鼠源MSTN蛋白,是研究MSTN作用的一种有效工具。