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第一部分强力霉素调控表达的人肝癌HepG2Tet-on细胞系的建立目的构建可以用强力霉素调控表达的人肝癌HepG2Tet-on细胞系方法脂质体转染法将pWHE146质粒转染到人肝癌HepG2细胞中,G418筛选出稳定表达细胞克隆;单克隆分别扩增后,瞬时转染pTRE-hyg-luc质粒,强力霉素诱导表达后,检测荧光素酶表达活性,挑选出受强力霉素调控的低背景、高表达的HepG2Tet-on细胞株。结果成功构建了一株受强力霉素调控的高表达低背景的HepG2Tet-on细胞株。结论HepG2Tet-on细胞株可用于外源基因的真核调控高表达,为研究真核基因功能提供了一种有力的实验手段。第二部分强力霉素调控HIF-1α表达的人肝癌HepG2Tet-on-HIF-1α双稳细胞系构建目的建立强力霉素调控HIF-1α表达的人肝癌HepG2Tet-on-HIF-1α双稳细胞系。方法脂质体转染法将重组质粒pTRE-HIF-1α转染入HepG2Tet-on细胞株,潮霉素(hyg)筛选出稳定表达细胞克隆HepG2Tet-on-HIF-1α;用强力霉素(1μg/ml)诱导后,用RT-PCR和Western-blot检测HIF-1α表达。结果强力霉素(1μg/ml)可诱导HepG2Tet-on-HIF-1α细胞HIF-1αmRNA(5.899±2.176倍)和蛋白表达增加(2.179±0.742倍)。结论成功建立强力霉素调控HIF-1α表达的人肝癌HepG2Tet-on-HIF-1α双稳细胞系,为深入研究HIF-1α在肝癌细胞中的作用提供了有力的实验手段。第三部分调控HIF-1α表达对人肝癌HepG2细胞增殖及侵袭能力的影响目的探讨体外常氧下,诱导表达HIF-1α对HepG2细胞增殖及侵袭能力的影响。方法常氧下,四甲基偶氮唑盐法检测缺氧诱导因子1α对细胞增殖、黏附能力的影响,Transwell法检测其对侵袭能力的影响。结果增殖实验中,Dox(+)组与Dox(-)组各时段A490nm值无差异(P>0.05);黏附实验中,Dox(+)组的A490nm值明显高于Dox(-)组(P=0.008);Dox(+)组侵袭细胞数(37.611±8.424)明显高于Dox(-)组(25.333±8.117)(P<0.001)。结论常氧下,缺氧诱导因子1α不影响HepG2细胞的增殖,但明显增加其黏附和侵袭能力。第四部分强力霉素调控HIF-1α表达的裸鼠肝癌皮下移植瘤模型的建立目的建立可以由强力霉素(Dox)诱导HIF-1α表达的裸鼠肝癌皮下移植瘤模型。方法注射法建立裸鼠肝癌HepG2Tet-on-HIF-1α细胞皮下移植瘤模型;口服强力霉素7周,RT-PCR和Western-blot检测皮下移植瘤中HIF-1α表达。结果与Dox(-)组相比,Dox(+)组裸鼠HepG2Tet-on-HIF-1α细胞皮下移植瘤中HIF-1αmRNA(4.303±1.004倍)和蛋白(1.666±0.079倍)表达增加。结论口服强力霉素可以有效地诱导裸鼠HepG2Tet-on-HIF-1α细胞皮下移植瘤中HIF-1αmRNA和蛋白表达增加,为体内研究HIF-1α对肝癌的作用提供了有效的实验手段。第五部分强力霉素调控HIF-1α表达对裸鼠肝癌皮下移植瘤的作用目的探讨体内调控表达HIF-1α对裸鼠肝癌皮下移植瘤生长和凋亡的影响。方法强力霉素诱导裸鼠肝癌HepG2Tet-on-HIF-1α细胞皮下移植瘤缺氧诱导因子1α表达;观察上调缺氧诱导因子1α表达对裸鼠皮下移植瘤生长的影响;Tunel法检测两组皮下移植瘤原位凋亡的情况;免疫组化和western blot检测两组皮下移植瘤中血管生成情况。结果Dox(+)组在肿瘤体积、重量、生长速度上都明显超过Dox(-)组,肿瘤内坏死面积明显小于Dox(-)组;同Dox(-)组相比,Dox(+)组裸鼠体重下降更为明显,两组均无肝、肺转移发生;Dox(+)组皮下移植瘤的细胞凋亡较Dox(-)组少,而血管则较多。结论体内实验中,缺氧诱导因子1α可促进肿瘤的生长;其机制可能是促进肿瘤内部血管生成,及减少肿瘤细胞凋亡。