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干扰素-γ（Interferon-gamma，IFN-γ）是一种具多种生物学活性的，可以由活化的Th1细胞、CT8细胞和NK细胞等多种细胞合成分泌的细胞因子。促进巨噬细胞活化、以及使成纤维细胞和上皮细胞合成干扰病毒增殖的分子，参与清除细胞内病原微生物。白细胞介素17（interleukin-17，IL-17）是主要由Th17细胞分泌的一种具有多种功能的细胞因子，其主要功能包括诱导靶细胞合成和分泌促炎因子和趋化因子,参与机体免疫清除病原菌。人工饲养的小熊猫由于犬瘟热、细小病等恶性传染病和多种寄生虫病，死亡率很高。因此急需一种对于针对小熊猫的具有抗病毒、抗寄生虫和增强免疫力的药物。本研究用ConA刺激小熊猫外周血淋巴细胞获得总RNA，依据大熊猫的基因序列设计合成小熊猫特异引物，采用反转录PCR（RT-PCR）合成cDNA，扩增和克隆了IFN-γ和IL-17基因，连接到克隆载体pGEM-T和表达载体pET-32a（+）。将重组表达载体转入到原核表达菌BL21（DE3），经IPTG诱导表达获得融合蛋白red panda IFN-γ（RpIFN-γ）和red panda IL-17(RpIL-17)。SDS-PAGE检测蛋白表达，优化蛋白RpIFN-γ和RpIL-17的表达条件，RpIFN-γ纯化后免疫兔子制得多抗，在MDCK和F81细胞分别检测RpIFN-γ抑制CAV和CPV的复制。获得的研究结果如下：1.克隆的小熊猫IFN-γ和IL-17基因分别为501bp和462bp，与大熊猫的相似性分别为95.4%和93.7%，分别编码167和152个氨基酸残基。2.构建了重组表达载体(pET-32a-IFN-γ和pET-32a-IL-17)，其最佳表达条件是IPTG浓度0.5mmol/L，温度和诱导时间分别16℃38h，和25℃20h。3.经镍柱纯化了RpIFN-γ和RpIL-17表达产物，West-blot鉴定其分子量分别约为38ku和35.5ku。4.免疫荧光试验和real-time PCR试验证明，RpIFN-γ在2倍稀释时的作用最明显，64被稀释后抗病毒作用已经不明显。上述结果表明，本研究成功地克隆了小熊猫IFN-γ和IL-17基因，构建出了原核表达载体；摸清了pET-32a-IFN-γ和pET-32a-IL-17的最适表达条件，获得了纯化的RpIFN-γ和RpIL-17重组蛋白；证明RpIFN-γ具有较好的抗病毒活性。本研究结果为临床改善小熊猫免疫功能，增强其抗病力提供了新的依据和手段。