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目的:探讨microRNA-148a(miR-148a)对胰腺癌细胞干性特征及恶性表型的影响及其调控机制。方法:1、采用实时定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,(qRT-PCR)方法检测61例胰腺癌组织和5株胰腺癌细胞(Panc-1,SW1990,MiaPaca-2,BxPC-3和Canpan-2)以及正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)中miR-148a的表达水平,并以胰腺癌组织中miR-148a的表达中位值分为高低表达组,进行生存分析。同时,运用在线数据库(http://kmplot.com/analysis)分析miR-148a的表达水平与患者预后的关系。2、通过Lipofectamine 3000将过表达或干扰miR-148a的相应慢病毒载体转染至胰腺癌细胞(Capan-2、BxPC-3和MiaPaca-2)中,实验分为4组:miR-con组(转染过表达空载体),miR-148a过表达组(转染miR-148a过表达载体),anti-miR-con组(转染干扰空载体),anti-miR-148a组(转染干扰miR-148a表达载体)。经嘌呤霉素筛选后获得相应稳转细胞系,采用qRT-PCR检测miR-148a表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,平板克隆检测细胞克隆形成能力,Transwell检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测上皮间质转化标记物(E-cadherin、Vimentin和N-cadherin)和干性相关标记物(Nanog、Oct4和Sox2)的表达。3、双荧光素酶报告基因实验验证miR-148a是否可与Wnt1-3′UTR相结合;qRT-PCR检测胰腺癌组织中miR-148a与Wnt1表达水平,并分析其相关性;qRT-PCR和Western blot检测Wnt1以及Wnt/β-catenin信号通路相关基因(β-catenin、MMP-9和cyclin D1)的表达水平。结果:1、miR-148a在胰腺癌组织中的表达水平明显低于相应的癌旁组织(P<0.001);与HPDE细胞株相比,miR-148a在5株胰腺癌细胞中的表达明显下调(均P<0.01);miR-148a低表达与胰腺癌患者预后不良有关(P<0.05)。2、与相应的对照组相比,miR-148a过表达组中的胰腺癌细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力显著下降(P<0.05),而anti-miR-148a组中的细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力显著增高(P<0.05)。同时,上调miR-148a的表达,上皮标记物E-cadherin表达水平明显增高(P<0.05),而间质标记物(Vimentin和N-cadherin)及干性标记物(Nanog、Oct4和Sox2)的表达水平显著降低(均P<0.01);相反,下调miR-148a的表达,E-cadherin表达水平明显降低(P<0.001),而间质标记物(Vimentin和N-cadherin)及干性标记物(Nanog、Oct4和Sox2)的表达水平显著增高(均P<0.05)。3、双荧光素酶报告基因实验证实miR-148a可与Wnt1-3′UTR相结合,上调胰腺癌细胞(Capan-2、BxPC-3和MiaPaca-2)的miR-148a表达能显著抑制Wnt1、β-catenin、MMP-9和cyclin D1的表达(P<0.05),而降低miR-148a表达则显著上调这些基因的表达(P<0.05)。此外,胰腺癌组织中Wnt1和miR-148a的表达水平呈负相关性(r=-0.3393,P<0.01)。结论:miR-148a在胰腺癌组织及胰腺癌细胞中表达下调,miR-148a的低表达与胰腺癌患者预后不良有关。miR-148a可抑制胰腺癌细胞干性特征及恶性表型,其作用机制与miR-148a靶向Wnt1负调控Wnt/β-catenin信号通路抑制上皮间质转化有关。