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本文报道了鱼类异常死亡、消化率确定以及诱食剂使用的几个营养学研究的方法学问题。研究分3部分：(1)意外死亡对评价罗非鱼(oreochromis niloticus)摄食和生长的影响及校正方法；(2)不同饲料蛋白水平下罗非鱼对肉骨粉、羽毛粉、豆粕和菜粕的消化率；(3)在饲料中添加乌贼内脏粉对罗非鱼摄食、生长和食物利用的影响。
实验内容如下：
(1)在室内水槽进行6周实验以确定罗非鱼意外死亡对摄食和生长的影响以及选择合理的方法来校正由死亡所带来的误差。按初始体重将实验鱼分为大鱼(42.7士0.4 g)、中鱼(17.1士0.4 g)和小鱼(11.0士0.3 g)三个规格，每个水槽内放养9尾大鱼、5尾中鱼和6尾小鱼，共计20尾。采用体外荧光色素可见法(VIE)标记每尾鱼，以定期移走不同规格和不同数量的鱼代替死亡，实验设计死亡大小鱼两种规格和死亡率O％、20％和40％三种比例，其中死亡率O％为对照组。采用三种方法计算摄食率(FI)和特定生长率(SGR)，第一种方法：FI1(％d-1)=100×I/[t×(W01+Wt1)/2]，SGR1(％d-1)=100 ×(1nWt1/nt1-1nW01/n01)/t；第二种方法：F12(％d-1)=100×∑(Im/Nm)×(W02/n01+Wt1/n2)/2]，SGR2(％d-1)=100×(1n Wt2/n2 -1nW02/N2)/t；第三种方法：Wt3=(nLF1FBWLF/nLF2+nMF1FBWMF/nMF2+nsF1FBWSF/nSF2)，FI3(％d-1)=1 00×∑(Im/Nm)//[t×(W01/n01+Wt3/N01)/2]，SGR3(％d-1)=100×(1n Wt3/n01-1nW 01/n01)/t。实验表明：第一种方法计算FI，在死亡小鱼时与对照组之间无显著差异，随着死亡率的增加，摄食率也随着增加；死亡大鱼时显著高于对照组，随着死亡率的增加，FI显著升高；第二种方法计算FI，死亡小鱼时显著低于对照组，而死亡大鱼显著高于对照组；第三种方法计算FI，除了死亡40％小鱼外各个处理之间与对照组无显著性差异，且此法与对照组的相对偏差较小。第一种方法计算SGR，死亡小鱼时，群体内SGR变大，且随着死亡比例的增加，SGR会逐渐升高；死亡大鱼时，群体内SGR降低，且随着死亡比例的增加，SGR逐渐降低，而第二、三种方法结论与之相反，且第三种方法与真实值的相对偏差较小。研究结果显示，在食物资源相对充足时，死亡小鱼，群体内FI和SGR都变小，且随着死亡率的增加，FI和SGR都会逐渐降低；死亡大鱼，群体内FI和SGR升高，且随着死亡率的增加，FI和SGR都逐渐升高。三种计算方法比较发现，当鱼类意外死亡时，第三种方法计算FI和SGR能够弥补由常规方法计算所带来的误差。 (2)试验以1％Cr203为指示剂，以70％基础饲料和30％待测原料组成试验饲料，测定了尼罗罗非鱼(101.00士0.56 g)在三种不同蛋白水平(25％、35％和45％)的基础饲料下对菜粕、肉骨粉的干物质、粗蛋白和能量的表观消化率；以及对菜粕、豆粕、肉骨粉和羽毛粉在蛋白含量为35％的基础饲料下的干物质、粗蛋白和能量的表观消化率。实验采用“投喂3天基础饲料+投喂4天试验饲料”组合投喂方法，和“收集2天基础饲料粪便+收集3天试验饲料粪便”的收集方法。实验表明：在水温25+1℃的试验条件下，尼罗罗非鱼对菜粕、肉骨粉、豆粕和羽毛粉干物质消化率、蛋白质消化率和能量消化率分别在40.98—67.99％、68.91-100.83％和56.02—77.96％。菜粕和肉骨粉在蛋白含量35％的基础饲料中的干物质消化率、蛋白质消化率和能量消化率都显著高于蛋白含量为25％和45％的基础饲料下的消化率。实验结果显示：在相同蛋白水平的基础饲料中，添加植物性蛋白原料的蛋白质消化率要高于动物性蛋白原料的消化率。在蛋白水平不同的基础饲料中，无论添加菜粕还是肉骨粉，饲料配方配制蛋白水平为35％的基础饲料，干物质消化率、蛋白质消化率和能量消化率都表现最好。
(3)通过室内水槽养殖实验检验了在饲料中添加乌贼内脏粉(SVM)对初始体重为2.57士0.0 g的吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)摄食、生长和食物利用的影响。以罗非鱼商业饲料为基础饲料(BD)，配制5种等氮等能实验饲料：TDl[96％BD+4％乌贼内脏粉类似物(MSM)]、TD2(96％BD+1％SVM+3％MSM)、TD3(96％BD+2％SVM+2％MSM)、TD4(96％BD+3％SVM+1％MSM)和TD5(96％BD+4％SVM)。MSM由53.6％酪蛋白+28.7％次粉+5.8％磷酸氢钙+12％豆油组成，其蛋白和脂肪含量与sVM相同。每个饲料处理设4个重复。结果表明，摄食TD4的鱼摄食率和特定生长率(SGR)显著的高于摄食TD1、TD2和TD3的鱼(P<0.05)，摄食TD5的鱼摄食率和SGR显著高于摄食TD1的鱼。在饲料中添加不同比例的SVM对鱼的饲料系数和鱼体组成无显著影响。研究结果初步表明对罗非鱼幼鱼摄食和生长产生明显作用的SVM添加水平应不低于3％，并且SVM内的诱食成分可能比其蛋白质含量对鱼摄食和生长的影响更大。
根据上述实验结果形成以下结论：(1)当实验中出现鱼的意外死亡时，第三种方法计算FI和SGR比较接近对照组，并且能够弥补由常规方法计算所带来的误差；(2)在蛋白水平不同的基础饲料中，无论添加菜粕还是肉骨粉，饲料配方配制蛋白水平为35％的基础饲料，干物质消化率、蛋白质消化率和能量消化率都表现最好；(3)罗非鱼幼鱼摄食和生长产生明显作用的SVM添加水平应不低于3％，且SVM内的诱食成分可能比其蛋白质含量对鱼摄食和生长的影响更大。