论文部分内容阅读
猪7号染色体存在显著影响背膘厚等脂肪沉积性状的数量性状座位（quantitative trait locus，QTL），氧化物酶增殖体激活受体δ（Peroxisome Proliferators-Activated Receptorδ，PPARδ）在调控脂肪生成和脂肪酸氧化过程中起重要作用，被认为是猪7号染色体背膘厚QTL区域最重要的位置功能候选基因。本研究选取了PPARδ基因转录起始位点5′端上游2100bp调控区序列进行了单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms,SNPs）筛选和转录活性研究，取得了以下结果： 1.通过对大白猪和梅山猪PPARδ上游调控区进行比较测序，发现在该基因转录起始位点上游655bp处存在G/A碱基突变，利用PCR-EcoRⅠ-RFLP方法建立了检测该位点多态性的方法，在中外10个不同猪种中进行了多态性验证和等位基因频率分析；在大白×梅山F2代资源群体和梅山猪群中对该SNP与胴体性状进行关联分析，发现该位点与背膘厚、胴体长、板油重等胴体性状显著相关，其中携带GG基因型个体的背膘厚平均值都要显著高于AA基因型个体。 2.利用Tess和promoter等软件对PPARδ基因2100bp的启动子区进行转录因子结合位点的预测，根据这些转录因子具体位置，设计了七段缺失片段，在C2C12﹑PK细胞中进行了转录活性分析，结果发现在转录起始位点上游100bp处的活性是最高的，而之后的活性要明显偏低，表明转录起始位点上游100bp处可能是核心启动子区；同时构建了携带A/G等位基因的启动子片段，转录活性试验发现在猪PK细胞、小鼠C2C12细胞中G→A突变分别导致了该区域转录活性下降了5.15和4.07倍，生物信息学分析表明该碱基突变导致了转录因子INO2和NBF结合位点的改变。