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目的本课题旨在研究苯丁酸氮芥（Chlorambucil）与伊布替尼（Ibrutinib）对套细胞淋巴瘤（Mantle cell lymphoma,MCL）细胞株Jeko-1的抑制及诱导凋亡作用,探讨两药联合是否有协同作用,并对其诱导凋亡的作用机制进行研究,以期为MCL,特别是复发难治性的MCL,提供一种潜在可行的新的治疗方案,进一步改善其预后,提高其总体生存期。方法在T25细胞培养瓶中培养Jeko-1细胞株,待培养瓶中的细胞密度长至80%时,将其离心、重悬,然后均匀种板于6孔板或96孔板中,根据不同的实验目的,进行不同的实验干预。实验分为三部分:第一部分:不同浓度的苯丁酸氮芥及不同浓度的伊布替尼对Jeko-1细胞的抑制及诱导凋亡作用用不同浓度苯丁酸氮芥（3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L,25μmol/L,50μmol/L）及不同浓度的伊布替尼（3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L,25μmol/L,50μmol/L）分别干预Jeko-1细胞,并设立对照组,各组分别培养24h,48h,72h,CCK-8法检测各组细胞增殖的情况,计算其抑制率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。第二部分:不同浓度的苯丁酸氮芥及伊布替尼的联合应用对Jeko-1细胞的抑制及诱导凋亡作用根据第一部分的实验结果,采用两药有效低剂量（单药抑制率<50%）进行联合应用,设置空白组、苯丁酸氮芥单药组、伊布替尼单药组、苯丁酸氮芥+伊布替尼联合组,主要实验干预为不同浓度的苯丁酸氮芥（3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L）与相同浓度的伊布替尼（3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L）联合应用于Jeko-1细胞,培养72小时后,CCK-8法检测细胞活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。第三部分:苯丁酸氮芥与伊布替尼的联合应用对Jeko-1细胞的作用机制研究采用Western Blot分别检测第二部分实验中空白组、苯丁酸氮芥单药组、伊布替尼单药组、苯丁酸氮芥+伊布替尼联合组的CASPASE-3、BCL-2、PI3K、p-AKT及AKT表达水平。结果第一部分:不同浓度的苯丁酸氮芥及不同浓度的伊布替尼对Jeko-1细胞的抑制及诱导凋亡作用单独用苯丁酸氮芥或伊布替尼处理Jeko-1细胞24h,48h,72h,细胞的活性均降低,其抑制率随着干预药物浓度的增大及干预时间的延长而增加,且凋亡率随着用药浓度的增加而呈递增趋势。其中,（3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L,25μmol/L,50μmol/L）的苯丁酸氮芥处理Jeko-1细胞72h后,细胞的抑制率分别为（17.41±1.14）%、（35.91±1.66）%、（51.76±1.98）%、（64.48±2.09）%、（82.86±2.88）%,凋亡率分别为（10.07±0.84）%、（22.13±3.01）%、（44.43±5.01）%、（62.77±3.95）%、（77.17±2.35）%。而（3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L,25μmol/L,50μmol/L）的伊布替尼处理Jeko-1细胞72h后,细胞的抑制率分别为（7.71±1.06）%、（15.28±2.20）%、（41.32±3.17）%、（79.70±3.43）%、（97.25±2.69）%,凋亡率分别为（7.60±0.44）%、（13.43±1.63）%、（35.10±2.21）%、（55.67±1.53）%、（98.57±1.70）%,与对照组相比,差异具有统计学意义（p值均<0.05）。当两种药物浓度大于12.5μmol/L,其凋亡率及抑制率均能够>50%。第二部分:不同浓度的苯丁酸氮芥及伊布替尼的联合应用对套Jeko-1细胞的抑制及诱导凋亡作用采用较低有效剂量的苯丁酸氮芥及伊布替尼进行等量联合应用。即苯丁酸氮芥（3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L）与相同浓度的伊布替尼（3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L）联合,与单一用药相比,两药联合对Jeko-1细胞的抑制率分别增加至（23.37±3.12）%、（62.58±3.94）%、（93.51±2.50）%,而凋亡率分别增加至（15.95±0.78）%、（54.75±0.07）%、（85.05±1.20）%,联合用药组与单独给药组相比,差异均有统计学意义（p<0.05）。第三部分:苯丁酸氮芥与伊布替尼的联合应用对Jeko-1细胞的作用机制研究苯丁酸氮芥单药处理Jeko-1细胞后,细胞的BCL-2、PI3K、p-AKT/AKT表达减弱,CASPASE-3表达增强,伊布替尼对上述蛋白表达趋势与苯丁酸氮芥结果相似。而联合用药组能够减弱BCL-2、PI3K、p-AKT/AKT的表达,而进一步显著提高CASPASE-3的表达,联合用药组与单独给药组相比,差异均有统计学意义（p<0.05）。结论苯丁酸氮芥及伊布替尼能均能诱导Jeko-1细胞的凋亡,在高浓度时,伊布替尼单药对Jeko-1细胞的抑制率优于苯丁酸氮芥单药,双药在较低有效浓度的联合应用可以产生协同作用,其作用机制主要是通过调节AKT信号通路发挥作用。这为MCL的新型治疗方案提供了实验及理论依据。