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目的筛选新的可能具有诊断意义的血吸虫蛋白分子,并对其进行生物信息学分析。方法以血吸虫病人血清筛选日本血吸虫15d肝期童虫cDNA文库,对阳性克隆插入片段的核苷酸进行序列分析,将结果通过Internet送入NCBI GenBank进行同源性比较并利用蛋白质分析软件进行生物信息学分析。结果经3轮筛选,共获15个阳性克隆,对其进行测序,获得11个基因,其中5个为编码日本血吸虫线粒体的基因,1个为编码日本血吸虫肌球蛋白的基因,其他5个分别为编码SjCHGC05315、SjCHGC01371、SjCHGC04782、SjCHGC05166、SjCHGC09769的基因。结论从日本血吸虫肝期童虫cDNA文库中筛选到一批日本血吸虫基因,为血吸虫病新的诊断候选分子的研究提供了材料。目的日本血吸虫病是中国严重的寄生虫病之一,政府每年投入大量资金用于血吸虫病的防治工作,但由于血吸虫生活史的复杂性,血吸虫病仍然没有得到很好的控制。血吸虫病控制的重要措施之一在于建立准确而又灵敏的诊断方法。本研究以寻找新的血吸虫病免疫诊断候选抗原分子为目的,对日本血吸虫表膜蛋白Tetraspanin2(SjTsp2)进行体外重组表达、纯化,建立重组抗原间接ELISA方法(rSj-ELISA)检测日本血吸虫重组表膜蛋白rSjTsp2用于日本血吸虫病免疫诊断的潜能,并与成虫粗抗原(SjAWA)平行检测,比较两种方法的敏感性和特异性之间的差异。并用纯化的重组蛋白rSjTsp2免疫小鼠,制备单克隆抗体,以进一步探讨rSjTsp2用于血吸虫病诊断的应用价值。方法诱导含SjTsp2编码基因的重组质粒pET28a(+)-SjTsp2表达出rSjTsp2,SDS-PAGE验证表达量,使用亲和层析法纯化重组蛋白,并用Lowry法检测纯化蛋白的浓度。将rSjTsp2和成虫粗抗原(SjAWA)包被反应板,棋盘滴定法分别确定最适抗原包被量和血清稀释度,建立rSjTsp2-ELISA和AWA -ELISA检测特异性抗体的方法并进行比较。用rSj Tsp2-ELISA和AWA-ELISA两种方法平行检测正常家兔血清,感染日本血吸虫后2周、4周和6周家兔血清,比较两种方法之间敏感性和特异性。继之,确定最佳试验条件后建立rSj Tsp2-ELISA检测34例急性、31例慢性和25例肝吸虫染者、9例线虫感染者和49例正常对照者血清标本。以rSjTsp2免疫小鼠6周后将其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行杂交融合,HAT筛选出杂交瘤细胞,经亚克隆及扩大培养,获得5株单克隆抗体。用Antibody Isotype Kit鉴定单抗Ig类别及亚型,用间接ELISA法检测杂交瘤上清和小鼠腹水效价,免疫荧光实验鉴定其特异性。结果成功诱导表达重组质粒pET28a(+)-SjTsp2,6×His亲和层析柱纯化获得rSjTsp2,SDS-PAGE检测其分子量与理论值一致。以rSjTsp2作为诊断抗原分子,经过条件优化建立了rSjTsp2-ELISA诊断兔日本血吸虫病的方法。用rSjTsp2-ELISA,AWA-ELISA两种方法平行检测正常兔血清,感染日本血吸虫后2周、4周和6周兔血清,结果示rSjTsp2用于日本血吸虫病免疫诊断与AWA-ELISA具有相似的敏感性和特异性, rSjTsp2检测感染日本血吸虫后2周兔血清阳性率为75.4%,高于后者的68.9%。rSjTsp2检测血吸虫感染病人、其他寄生虫感染病人及正常人血清特异性抗体,初步结果显示该方法具有一定的敏感性和特异性。同时获得5株特异性抗rSjTsp2表膜蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单抗Ig类别及亚型,杂交瘤上清和小鼠腹水效价,免疫荧光鉴定其特异性,结果显示rSjTsp2为日本血吸虫成虫表膜蛋白。结论体外成功表达、纯化了日本血吸虫表膜蛋白Tetraspanin2(SjTsp2),建立了间接rSj-ELISA方法检测感染家兔血清IgG抗体,其原核表达重组蛋白具有一定的诊断应用潜能。本研究还获得了5株特异性抗rSjTsp2表膜蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。