高表达HE4人卵巢浆液性腺癌原代细胞的核酸适配体的筛选与鉴定

来源 :安徽医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liulang75281899
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
背景:卵巢癌是女性妇科肿瘤中常见的死亡原因之一。在中国,大多数卵巢癌患者在确诊时已经到达中晚期,从而导致患者的死亡率高、易转移以及预后差等特点。因此,寻找有助于卵巢癌早期诊断、治疗以及预后评价相关的指标显得格外重要。目前,cell-SELEX技术作为肿瘤诊断、治疗以及肿瘤标志物的研究热点,它可以在不能区分整个细胞上靶标的情况下,获得一组高度特异性的适配体分子探针。目前文献尚未报道关于与高表达HE4的人卵巢浆液性腺癌原代细胞的核酸适配体,故本研究欲利用cell-SELEX技术筛选出针对高表达HE4的人卵巢浆液性腺癌原代细胞的高特异性的核酸适配体。
  目的:在体外利用cell-SELEX技术筛选出针对高表达HE4的人卵巢浆液性腺癌的原代细胞的核酸适配体。
  方法:以高表达HE4的人卵巢浆液性腺癌的原代细胞为阳性筛选细胞,以不表达HE4的卵巢癌H08910细胞为阴性筛选细胞,利用cell-SELEX技术将上述两种细胞与体外随机建立的单链核苷酸文库进行逐轮筛选,并在第四轮筛选时加入卵巢正常上皮细胞HOSEpic同时进行筛选。利用流式细胞术检测以及激光共聚焦显微镜共同分析挑选出针对高表达HE4的人卵巢浆液性腺癌的原代细胞的核酸适配体的生物学性质。
  结果:1.经过11轮筛选,最终获得3条与高表达HE4的人卵巢浆液性腺癌的原代细胞特异性结合的ssDNA。这三条核酸适配体的Kd值介于0.1-11μm/L。
  2.通过测序结果显示以上3条ssDNA为三种不同的核苷酸序列,分别命名为mApoc46、Apoc37、Apo34,且符合适配体的生物学特性。
  3.流式细胞术与激光共聚焦试验结果显示mApoc46的ssDNA与阳性筛选细胞亲和力最高,特异性最敏感。且核酸适配体mApoc46与MCF-7、MGC-803、HepG-2和Hela无明显结合。将Apoc46优化后碱基序列命名为mApoc46,经流式细胞术与激光共聚焦实验检测,结果显示其亲和力与特异性均明显优于Apoc46且不存在个体差异性。
  结论:本研究通过cell-SELEX技术筛选得到能够特异性识别高表达HE4的人卵巢浆液性腺癌的原代细胞的核酸适配体Apoc46,这将为卵巢癌早期诊断、精准定位以及靶向治疗,奠定了一定的基础。
其他文献
期刊
学位
学位
学位
学位
期刊
学位
学位
期刊
学位