异种去细胞神经支架复合Fibronectin、Laminin质粒修复周围神经缺损的实验研究

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目的:利用分子生物学方法获取兔的纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)的基因cDNA构建质粒载体,以山羊胫神经制备去细胞神经支架(ANS),将二者复合后桥接兔坐骨神经神经缺损,进一步研究FN、LN质粒与异种ANS复合后用于修复周围神经缺损的效果及FN、LN两种蛋白的表达情况。  方法:将兔坐骨神经内FN和LN两个蛋白的基因的cDNA获取、基因扩增,并构建FN、LN质粒载体。取5月龄新西兰大白兔50只,随机分为A、B、C、D、E五组,每组10只,手术切断坐骨神经,建立右侧坐骨神经10mm缺损模型,依次利用对应成分修复神经缺损。A组:复合FN、LN质粒的ANS;B组:复合FN质粒的ANS;C组:复合LN质粒的ANS;D组:单纯ANS;E组:自体神经。于术后4w对实验动物行电生理学检测,于术后12W对修复神经段取材行组织学观察和小腿肌纤维横径等检测,评定神经功能恢复情况,比较不同分组之间的神经损伤再生修复效果水平。对实验动物一般情况观察,创口愈合情况、有无溃疡,患侧肌肉萎缩等,同时,运用蛋白印迹法(Western Blot)检测移植物FN、LN两种蛋白的表达,分析不同实验组两种蛋白表达量的变化。  结果:1.采用双酶切鉴定FN、LN重组质粒示:FN、LN双酶切,切出条带大小符合理论预期。初步鉴定FN、LN质粒构建成功。2、术后4周行运动诱发电位检测,计算神经传导速度,A、B、C、E实验组均优于D组(P<0.05),且以A组恢复效果最佳,B、C、E组间无明显差异(见表2)。3、兔腓肠肌纤维横径检测:A、B、C、E实验组腓肠肌横径均大于D组(P<0.05),且以A组横径最大,B、C、E组间无明显差异(见表3)。4、蛋白印迹法显示FN、LN质粒可促进移植物内FN、LN的表达。  结论:A组的神经再生效果优于其他B、C、D、E组。经化学去细胞法制备的山羊胫神经去细胞神经支架能够移植于兔,成功修复兔坐骨神经缺损,而且复合FN、LN质粒的ANS在神经修复上的效果明显优于单纯使用ANS。
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